补肾调肝周期疗法及组方含药血清对Ishikawa细胞miR⁃140⁃5p/VEGF信号通路的影响  

作　　者：王茜[1] 何忆清 刘泉 张颖 杨硕[1] 

机构地区：[1]湖南中医药大学,湖南长沙410208

出　　处：《中成药》2024年第8期2756-2762,共7页Chinese Traditional Patent Medicine

基　　金：国家自然科学基金项目(81503611);湖南省自然科学基金(2020JJ5427);湖南省教育厅优秀青年项目基金(20B428);湖南中医药大学中西医结合一流学科开放基金(2020ZXYJH59)。

摘　　要：目的研究补肾调肝周期疗法及组方对Ishikawa细胞增殖、分泌及miR-140-5p/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路的影响。方法制备各组含药血清及空白血清,运用慢病毒转染构建miR-140-5P稳定过表达的Ishikawa细胞株,将细胞分为阴性对照组(转染miR-140-5p NC+空白血清)、过表达组(转染miR-140-5p siRNA+空白血清)、阳性对照组(转染miR-140-5p siRNA+阿司匹林含药血清)、逍遥散组(转染miR-140-5p siRNA+逍遥散含药血清)、三子养膜汤组(转染miR-140-5p siRNA+三子养膜汤含药血清)、补肾调肝周期疗法组(转染miR-140-5p siRNA+周期疗法含药血清)。倒置荧光显微镜观察转染效率;ELISA法检测细胞培养液上清E_(2)、P水平;流式细胞仪测定细胞周期分布;CCK-8法检测细胞增殖效率;Western blot法检测细胞VEGF、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)蛋白表达;RT-qPCR法检测细胞miR-140-5p、VEGF、ER、PR mRNA表达。结果成功构建miR-140-5p稳定过表达的Ishikawa细胞系。miR-140-5p过表达会抑制Ishikawa细胞E_(2)、P的分泌(P<0.01),使Ishikawa细胞发生G 2/M期阻滞(P<0.01),抑制Ishikawa细胞的增殖(P<0.01)和VEGF、ER、PR mRNA表达(P<0.01);而各组含药血清均能降低Ishikawa细胞miR-140-5p表达(P<0.01),促进E_(2)、P的分泌(P<0.01),使细胞周期基本恢复正常(P<0.05,P<0.01),促进细胞增殖(P<0.01),升高VEGF mRNA表达(P<0.01);阿司匹林、逍遥散、三子养膜汤含药血清均能升高ER、PR mRNA表达(P<0.05,P<0.01);补肾调肝周期疗法含药血清能升高ER mRNA表达(P<0.01)。结论miR-140-5p过表达会损伤子宫内膜容受性,可能是子宫内膜容受性的关键调控因子,补肾调肝周期疗法及组方可能通过介导miR-140-5p/VEGF,靶向上调VEGF、ER、PR基因的表达,从而促进子宫内膜细胞增殖、改善子宫内膜细胞内分泌及局部血运以提升子宫内膜容受性。

关 键 词：补肾调肝周期疗法 逍遥散组 三子养膜汤组 子宫内膜容受性 miR-140-5p/VEGF ISHIKAWA细胞 

分 类 号：R285.5[医药卫生—中药学]