番鸭细小病毒VP3蛋白的原核表达及抗原性分析  

作　　者：刘郁夫 萧碧扬 董楠 夏兆伦 申翰钦 陈瑞爱[3,4] 

机构地区：[1]肇庆学院生命科学学院,广东肇庆526060 [2]广东精捷检验检测有限公司,广东云浮527400 [3]华南农业大学兽医学院,广州510642 [4]华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司,广东肇庆526238 [5]广州昊牧生物科技有限公司,广州510642

出　　处：《养禽与禽病防治》2024年第8期2-6,共5页Poultry Husbandry and Disease Control

基　　金：云浮科技计划项目(2022020202);肇庆市科技创新指导类项目(2023040308002);肇庆学院大学生创新创业项目(X202310580123)。

摘　　要：为原核表达番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)VP3蛋白,评价MDPV VP3蛋白在番鸭中的抗原性。将MDPV VP3基因按照大肠杆菌密码子偏嗜性优化后,克隆至原核表达载体pET-28a,经IPTG诱导表达和His镍柱纯化后,获得VP3纯化蛋白,并进行SDS-PAGE蛋白电泳和western blots鉴定。通过透射电镜观察MDPV VP3蛋白在大肠杆菌中形成病毒样颗粒的情况,以纯化后的VP3蛋白免疫种番鸭,评价MDPV VP3蛋白的抗原性。结果显示,MDPVVP3蛋白可在大肠杆菌BL21(DE3)中以沉淀包涵体的形式高效表达,SDS-PAGE和Western blots试验结果显示VP3目的条带大小为60kDa左右,与预期相符,纯化后VP3蛋白浓度为5.64mg/mL。通过透射电镜,可在VP3蛋白表达上清样品中观察到直径约为20nm的颗粒样物质,表明单独表达MDPV VP3蛋白可在大肠杆菌中自组装形成病毒样颗粒。将制备的VP3蛋白免疫种番鸭,利用间接ELISA试验检测番鸭血清中特异性抗体水平,免疫后14d,OD450值为0.75~0.90,表明制备的VP3蛋白抗原性良好。本试验在大肠杆菌中成功表达纯化MDPVVP3蛋白,具有良好的抗原性,具备研制MDPV亚单位疫苗的开发前景,本研究可为进一步评MDPVVP3蛋白的免疫保护效果提供前期基础。

关 键 词：番鸭细小病毒 VP3 原核表达 抗原性 

分 类 号：S855.3[农业科学—临床兽医学]