羊种布氏杆菌M5-90△26基因缺失疫苗双重实时荧光定量PCR方法的建立  

作　　者：刘尚博 王振华 郑可 秦建华[1] 

机构地区：[1]河北农业大学动物医学院,070000 [2]石家庄圣博生物科技有限公司,050031 [3]广西壮族自治区人民医院,530021

出　　处：《今日畜牧兽医》2024年第8期1-4,共4页

基　　金：河北省现代农业产业技术体系第三期奶牛创新团队建设项目奶牛疫病防控与减抗(HBCT2023180201)。

摘　　要：为了寻找一种能够鉴别布氏杆菌M5-90△26疫苗株与其他布氏杆菌菌株的双重实时荧光定量PCR检测方法。针对布氏杆菌菌株的16S rRNA和Bp26基因,各设计一套引物和探针,并优化反应体系和反应程序。以布氏杆菌A19、S2、M5-90和M5-90△26四种疫苗株以及大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌、沙门氏菌、链球菌进行双重荧光定量PCR扩增,评价该方法的特异性。克隆构建PCR_16S rRNA_Bp26标准品,通过倍比稀释进行双重荧光定量PCR扩增,评价该方法的灵敏度。使用该方法与虎红平板凝集试验、试管凝集试验进行检测结果对比,评价该方法的可行性。结果显示,本方法特异性好,布氏杆菌A19、S2、M5-90三种疫苗株均同时出现Bp26基因和16S rRNA基因的扩增,布氏杆菌M5-90△26疫苗株只出现16S rRNA基因的扩增,大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌、沙门氏菌、链球菌均未出现扩增曲线。该方法建立的16S rRNA基因序列扩增通道和Bp26基因序列扩增通道对标准品的最低检测限均达5 copies/μL。该方法对临床样本的检测结果与虎红平板凝集试验、试管凝集试验检测结果符合率较高,说明建立的羊种布氏杆菌M5-90△26基因缺失疫苗双重实时荧光定量PCR检测方法可用于临床的检测,为鉴别布氏杆菌M5-90△26疫苗株免疫与布氏杆菌野毒株感染提供一种可行的检测方法。

关 键 词：布氏杆菌 M5-90△26疫苗株 双重实时荧光定量PCR 鉴别诊断 

分 类 号：S859.797[农业科学—临床兽医学]