细胞间质上皮转化因子(c-Met)中和抗体的筛选及鉴定  

作　　者：蒋明 于丽华 付敏 毛玉婷 尹衍新 

机构地区：[1]同济大学苏州研究院生物医药研究中心,江苏苏州215000

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2024年第9期777-782,共6页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家科技重大专项-重大新药创制(2019ZX09732002-012);国家科技重大专项-重大新药创制(2019ZX09732002-007-002);国家自然科学基金(82071473);山东省重点研发计划(2020CXGC011301)。

摘　　要：目的通过抗体的随机突变库和细胞展示技术,对具有中和活性的细胞间质上皮转化因子(c-Met)抗体进行结构和活性优化,获得亲和力高、激动活性低的抗体,并使其保持亲本抗体的中和及内化活性,提高抗体偶联药物(ADC)的成药性。方法构建和筛选c-Met中和激动型抗体3E1D7的重链互补决定区3(CDR3)随机突变库,获得CDR3区有4个氨基酸突变的候选抗体2G5。通过ELISA检测2G5的中和活性,流式细胞术检测其在A549细胞的内化,CCK-8法检测2G5对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响,通过Transwell^(TM)小室检测2G5对A549细胞迁移的影响,通过Western blot法检测2G5对c-Met磷酸化的影响。结果突变抗体2G5与抗原c-Met保持较高的结合能力,半数有效浓度(EC_(50))为41.53 ng/mL,并具有较高的中和活性。在A549细胞中,2G5引起显著的内化效应,但不激活c-Met信号通路和细胞迁移。2G5不能引起HUVEC增殖。结论通过建立抗体随机突变库可优化c-Met抗体的活性,获得成药性更高的突变型抗体。

关 键 词：细胞间质上皮转化因子(c-Met) 中和抗体 流式细胞术 

分 类 号：R392-33[医药卫生—免疫学] Q279[医药卫生—基础医学] R979.19[生物学—细胞生物学] S852.43[农业科学—基础兽医学]