抗新型鹅星状病毒Cap蛋白单克隆抗体的制备与鉴定  

Preparation and identification of monoclonal antibodies against goose astrovirus Cap protein

作　　者：代格 章丽娇 黄欣梅[2,3] 杨靖 刘青涛 韩凯凯[2,3] 刘宇卓 李银[2] 薛峰 赵冬敏[2,3] Dai Ge

机构地区：[1]南京农业大学动物医学院,江苏南京210095 [2]江苏省农业科学院兽医研究所,江苏南京210014 [3]江苏大学生命科学学院,江苏镇江212013

出　　处：《江苏农业科学》2024年第21期204-208,共5页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：江苏省农业科技自主创新资金[编号:CX(23)3077];横向课题“雏鹅痛风病因确定和防控方法初探”。

摘　　要：制备抗新型鹅星状病毒Cap蛋白的单克隆抗体,为建立基于病毒Cap蛋白的快速诊断方法奠定基础。构建pET-32a-ORF2重组质粒,转化BL21、IPTG诱导,原核表达出新型鹅星状病毒Cap蛋白,并对其分别进行SDS-PAGE和Western Blot鉴定。结果表明,重组蛋白主要以包涵体的形式表达且具有一定的免疫学活性。以原核表达的Cap蛋白为免疫原,免疫6~8周龄BALB/c雌性小鼠,对免疫后血清效价为阳性的小鼠取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合。做间接ELISA筛选出阳性克隆,并以有限稀释法连续进行3次亚克隆,成功筛选出1株分泌抗新型鹅星状病毒Cap蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为1D7,采用腹水法大量制备单克隆抗体,效价可达1∶64 000。鉴定出1D7的亚型为IgM。1D7分别与重组Cap蛋白和接种新型鹅星状病毒的LMH细胞进行Western Blot分析,发现该单抗既能识别重组Cap蛋白又能与新型鹅星状病毒发生特异性反应。

关 键 词：鹅星状病毒 CAP蛋白 原核表达 单克隆抗体 

分 类 号：S852.657[农业科学—基础兽医学]