miR-876调控ITGB2/FAK信号通路对鼠BMSCs成骨分化的影响  

作　　者：鲍运平[1] 朱正荣[2] 田丰 易洋[2] 程帆 

机构地区：[1]长江大学第一临床医学院,湖北荆州434000 [2]荆州市第一人民医院关节外科

出　　处：《中国老年学杂志》2024年第22期5568-5574,共7页Chinese Journal of Gerontology

基　　金：荆州市科学技术局资助项目(2019CC56-01)。

摘　　要：目的探讨微小核糖核酸(miR)-876对鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响,并探讨其对整联蛋白β(ITGB)2/局部黏着斑激酶(FAK)信号通路的调控机制。方法分离并鉴定鼠BMSCs。将miR-876模拟物阴性对照(miR-876 mimics-NC)、miR-876模拟物(miR-876 mimics)、miR-876抑制剂阴性对照(miR-876 inhibitor-NC)和miR-876抑制剂(miR-876 inhibitor)核酸序列转染Lipofectamine3000并与鼠BMSCs共培养,分别记为过表达阴性对照组、过表达组、沉默阴性对照组、沉默组,另设置空白对照组(未转染,仅鼠BMSCs培养),每组设置5个复孔。培养1 w后检测碱性磷酸酶(ALP)染色及活性定量实验检测早期成骨分化;培养2 w后茜素红染色检测晚期钙盐沉积;培养2 w后实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-876、ITGB2、FAK及成骨分化特异性标志物[包括Runt相关转录因子(Runx)2、骨钙蛋白(OCN)、骨相关转录因子抗体(Osterix)、ALP]信使核糖核酸(mRNA)表达;Western印迹检测ITGB2、FAK及成骨分化特异性标志物蛋白表达;荧光素酶报告基因实验验证ITGB2是miR-876的靶基因。结果经检测证实为鼠BMSCs;各组转染效率均>80%;过表达组ALP活性,miR-876、ITGB2、FAK、Runx2、OCN、Osterix、ALP mRNA表达,Runx2、OCN、Osterix、ALP蛋白表达均显著高于过表达阴性对照组和空白对照组(P<0.05),沉默组上述指标均显著低于沉默阴性对照组和空白对照组(P<0.05),且茜素红染色结果与上述一致;荧光素酶报告基因实验验证ITGB2是miR-876的靶基因。结论miR-876基因过表达可促进鼠BMSCs成骨分化,推测其机制为靶向ITGB2/FAK信号通路,上调成骨分化特异性标志物表达;而miR-876基因沉默可抑制鼠BMSCs成骨分化,推测其机制为靶向ITGB2/FAK信号通路,下调成骨分化特异性标志物表达。

关 键 词：微小核糖核酸-34a 整联蛋白β2 局部黏着斑激酶 骨髓间充质干细胞 成骨分化 

分 类 号：R329[医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]