NK细胞体外杀伤活性检测方法建立与验证  

作　　者：刘家权 

机构地区：[1]深圳中检联新药检测有限责任公司,518110

出　　处：《中国医药生物技术》2025年第1期112-117,共6页Chinese Medicinal Biotechnology

摘　　要：目的建立自然杀伤细胞(NK细胞)体外杀伤活性检测方法并进行验证。方法以慢性髓源白血病细胞K562为靶细胞,使用5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯(CFDA SE)标记后,将携带CFSE荧光的靶细胞按照不同的效靶比与NK细胞共培养。使用死细胞染料碘化丙啶(PI)与早期凋亡染料Annexin V对共培养的细胞进行染色后,采用流式细胞仪对CFSE荧光筛对靶细胞圈门,同步圈门PI检测其死亡率与Annexin V检测早期凋亡率,计算杀伤率。对活细胞染料CFDA SE与死细胞染料PI及早期凋亡染料Annexin V使用量、检测限与定量限、准确度、重复性、再现性进行验证。结果经过活细胞染料CFDA SE用量验证后,2×10^(6)个K562靶细胞的CFDA SE最佳使用量为0.2μL。PI与Annexin V的最佳使用量均为1μL/Test。靶细胞死亡与早期凋亡检出限为0.1%,定量限为0.5%。准确度、重复性、再现性验证结果均能满足YY/T 0588《流式细胞仪》中表面标志物检测的重复性a)阳性百分比≥30%时,CV值应≤8%;或b)阳性百分比<30%时,CV值应≤15%的要求。t值与理论值符合95%置信水平中的统计学要求。结论建立的NK细胞体外杀伤活性检测方法符合标准化评价体系,为NK细胞功能检测与质量评价提供了参考依据。

关 键 词：NK细胞 K562细胞株 CFDA SE PI Annexin V 流式细胞仪 

分 类 号：Q813[生物学—生物工程]