犬2型腺病毒E3区的克隆及其缺失改造  

Clone and deletion of the E3 region of SY strain of CVA-2

作　　者：邱薇[1] 夏咸柱[2] 范泉水[1] 扈荣良[2] 何洪彬[3] 余春 王雷[2] 高玉伟[2] 张守峰[2] 

机构地区：[1]成都军区联勤部军事医学研究所,云南昆明650032 [2]解放军军需大学军事兽医研究所,吉林长春1300621 [3]东北农业大学,黑龙江哈尔滨150030 [4]北京军区军犬队,北京100021

出　　处：《生物技术》2002年第5期6-8,共3页Biotechnology

基　　金：全军"十五"医药卫生重点项目基金资助项目 (0 1 -Z -0 92 );国家自然科学基金项目 (30 1 70 70 4 )

摘　　要：为构建可用于插入外源基因的犬 2型腺病毒 (CAV - 2 )E3区表达载体 ,用KpnI对CAV - 2DNA进行酶切 ,回收含E3区的KpnIB片段并将其克隆到质粒pBluescriptIIKS(+)中 ,获得了正向和反向插入的重组质粒 ,并对E3区进行了序列测定。根据E3区两末端的序列合成了两对突变引物 ,每对引物分别在E3区的 2 4 986bp及 2 6 36 0bp处各引入一个BglⅡ酶切位点。以E3区正向插入的重组质粒pBE3- 2为模板 ,分别用两对突变引物经PCR法连续进行两次点突变 ,通过BglII酶切 ,最终筛选到在E3区的首尾两端各引入一个BglII酶切位点的突变重组质粒pBEM。利用BglII酶切将E3区切除约 1 4kb的片段 ,然后在缺失部位插入了人工接头 ,接头设计了 5个单一酶切位点 ,得到的pBE3L质粒可用于外源基因的插入。To construct the CAV-2 E3 region expressing vector for foreign genes, the E3 region of the SY strain of CAV-2 was cloned by enzyme digestion and then sequensed. Two pairs of mutation primers were designed according to the sequences of the two ends of the E3 region. After two times of mutation, two Bgl II sites were introduced into the recombinent plasmid. A 1.4kb fragment of E3 region was deleted through the digestion of Bgl II and a linker with 5 single enzyme sites was inserted into the Bgl II site. The plasmid can be used to construct E3 expressing vectors of CAV-2.

关 键 词：犬2型腺病毒 E3区 克隆 缺失改造 

分 类 号：S852.655[农业科学—基础兽医学]