AAV载体质粒介导的荧光素酶shRNA抑制其在哺乳动物细胞中的表达  

Inhibition of Luciferase expression in mammalian cells by AAV vector plasmid mediated Luciferase shRNA

作　　者：马鑫[1] 鲁晓春[2] 彭建强 谭淑萍 袁振华[1] 尹芳[4] 王宏[1] 吴小兵[1] 侯云德[1] 

机构地区：[1]中国预防医学科学院病毒学研究所基因室,北京100052 [2]解放军总医院老年心内科 [3]本元正阳基因技术股份有限公司 [4]广州南方医院血液科

出　　处：《中华实验和临床病毒学杂志》2002年第3期253-255,共3页Chinese Journal of Experimental and Clinical Virology

摘　　要：目的　构建荧光素酶短发夹环产生质粒在BHK 2 1细胞中抑制荧光素酶的表达。方法　从人基因组DNA中用PCR方法调出人U6snRNA启动子 ,接以被 9bp序列间隔的 2 1bp荧光素酶靶序列的反向重复序列 ,置于AAV载体质粒pSNAV中 ,构建成荧光素酶短发夹环RNA(shRNA)产生质粒pSNAV U6 Luc。与pMAMneoLuc质粒共转染BHK 2 1细胞 ,检测其对荧光素酶表达的影响。并且单独转染荧光素酶细胞株 ,检测其抑制荧光素酶表达的效果。结果　pSNAV U6 Luc对共转染的pMAMneoLuc中荧光素酶的表达抑制 5 0 % ,而对荧光素酶细胞株中荧光素酶的表达抑制 70 %。结论　实验表明荧光素酶shRNA产生质粒能够有效抑制荧光素酶在BHK 2 1细胞中的表达。Objective Constructing a plasmid containg the shRNA of luciferase to suppress the expression of luciferase in BHK 21 cell. Methods A 334 bp human U6 snRNA promoter was amplified from human genomic DNA by PCR and ligated to a 21 bp reverse repeated motif of luciferase target sequence with 9 bp spacer and AAV plasmid pSNAV.The recombinant pSNAV/U6/Luc plasmid cotransfected with pMAMneoLuc or transfected luciferase cell line to detect the effect of luciferase expression seperately. Results pSNAV/U6/luc suppresses the luciferase expression from pMAMneoLuc by 50% and luciferase cell line by 70%. Conclusion The results showed that the short hairpin RNA of luciferase can efficiently suppress it's expression in BHK 21.

关 键 词：AAV载体 质粒介导 荧光素酶 短发夹环RNA 哺乳动物 基因表达 

分 类 号：R346[医药卫生—基础医学]