用PCR技术从cDNA文库中获取目的基因长片段  

作　　者：汪思应[1] 郑红[1] 程洁[1] 余科科[1] 许望翔[2] 李俊[3] 

机构地区：[1]安徽医科大学病理生理学教研室,合肥230032 [2]军事医学科学院,北京100850 [3]安徽医科大学临床药理研究所,合肥230032

出　　处：《安徽医药》2003年第1期58-60,共3页Anhui Medical and Pharmaceutical Journal

基　　金：国家自然科学基金 (39670 366);安徽省自然科学基金 (0 0 0 4 4 2 0 2 )

摘　　要：目的　建立一种简便有效的获取cDNA大片段的实验技术。方法　应用PCR原理 ,设计特异引物结合文库载体引物对大鼠胎肝cDNA文库进行PCR扩增 ;用随机引物标记法标记已知小片段“目的基因”(30 0bp± )作为探针 ,对PCR产物进行Sorthern杂交以检验“目的基因”片段的正确性及长度 ;回收“目的基因”片段并连接入PGEM T载体 ,转染JM 10 9并扩增后 ,提取“目的基因”测序。结果　琼脂糖凝胶电泳发现PCR扩增产物有多条不同长度的段 ,Sorthern杂交发现一段长度为 1 5kb的cDNA片段为“目的基因” ;测序结果与GeneBank进行Blaste分析 ,该基因为一株新的序列 ,已在GeneBank中登录注册 (RatLiverRegeneration relatedPro tein 1,RLRP 1AF2 36 0 5 4 )。

关 键 词：PCR技术 CDNA文库 获取 目的基因长片段 实验方法 分子生物学 随机引物标记法 

分 类 号：R346[医药卫生—基础医学]