重组端粒酶pEGFP-hTRT质粒的构建  

CONSTRUCTION OF RECOMBINANT pEGFP/hTRT PLASMID

作　　者：周海文[1] 周曾同[1] 杨雯君[2] 刘德莉[3] 李卿[3] 胡洪亮[3] 刘伟[3] 崔磊[3] 曹谊林[3] 

机构地区：[1]上海第二医科大学附属第九人民医院口腔内科口腔研究所,上海200011 [2]上海第二医科大学附属第九人民医院口腔颌面外科,上海200011 [3]上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室,上海200011

出　　处：《中国修复重建外科杂志》2003年第3期230-232,共3页Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery

基　　金：国家自然科学基金资助项目 (39970 791 ) ;上海市教委科研基金资助项目 (99XD1 4 0 0 3)~~

摘　　要：目的　构建具有绿色荧光蛋白报道 (GFP)基因的端粒酶真核质粒载体 ,为转染细胞、延长细胞寿命提供基础。　方法　酶切含人端粒酶逆转录酶 (h TRT)基因的 p GRN14 5质粒获取 h TRT片段 ,插入经酶切及磷酸化处理的 GFP载体 p EGFP- C1,形成 8.1kb质粒 ,经 Hind 、Not 酶切电泳筛选、鉴定并测序。　结果　经酶切电泳分析得到3.4 kb及 4 .7kb大小的两片段 ;测序结果显示接头两端序列正确。　结论　重组端粒酶 p EGFP- h TRT质粒的成功构建 ,可用于细胞转染 ,对进一步研究组织工程种子细胞的衰老问题具有重要意义。Objective To construct a plasmid which has a reporter gene for exploring the role of human telomerase reverse transcriptase(hTRT) in in-vitro cell cultivation. Methods hTRT was cut by restricted enzyme from plasmid pGRN145 and inserted to plasmid pEGFP-C1(enhanced green fluorescent protein). Results Restricted enzyme analysis and DNA sequencing showed that the sequence of the pEGFP -hTRT transgenic plasmid was correct. Conclusion The recombinant vector pEGFP-hTRT has been successfully constructed, and it can be used as a transgenic plasmid in generating immortalized cell lines.

关 键 词：端粒酶 pEGFP-hTRT质粒 构建 重组质粒 绿色荧光蛋白 

分 类 号：R346[医药卫生—基础医学]