pWPXL-RNASEH2A-GFP,pWPXL-RNASEH2A和pWPXL-RNASEH2A-HA慢病毒表达载体的构建  

作　　者：巩秀[1] 刘爱芬[1] 吕秀芳[1] 赵奉波 

机构地区：[1]南通大学医学院基础医学研究室,南通226001

出　　处：《南通大学学报（医学版）》2015年第5期352-356,340,共6页Journal of Nantong University(Medical sciences)

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81402024);江苏省高校自然科学研究面上项目(12KJB320005);江苏省自然科学青年基金资助项目(BK20140437)

摘　　要：目的 :构建p WPXL-RNASEH2A-GFP,p WPXL-RNASEH2A和p WPXL-RNASEH2A-HA慢病毒过表达载体。方法:通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)技术扩增人RNASEH2A基因的蛋白编码区(coding domain sequence,CDS),将纯化的PCR产物连接到p WPXL慢病毒表达载体,将3种重组载体与包装质粒共同转染HEK293T细胞,收集病毒上清液;再次感染HEK293T细胞并收集细胞蛋白,通过Western Blot检测RNASEH2A蛋白的表达水平。结果 :Western Blot结果显示RNASEH2A抗体、GFP抗体和HA抗体均能检测到过表达的RNASEH2A或RNASEH2A融合蛋白。结论:成功构建了可用于哺乳动物细胞的p WPXL-RNASEH2A,p WPXL-RNASEH2AGFP和p WPXL-RNASEH2A-HA慢病毒表达载体。

关 键 词：RNASEH2A 绿色荧光蛋白 血细胞凝集素序列 融合蛋白 

分 类 号：R373[医药卫生—病原生物学]