山核桃RAPD反应体系的优化  

The optimal reaction system of RAPD in Carya cathayensis

作　　者：王正加[1] 黄坚钦[2] 郭传友[3] 杨萍[2] 王华芳[1] 

机构地区：[1]北京林业大学生物科学与技术学院,北京100083 [2]浙江林学院生命科学学院,浙江临安311300 [3]南京林业大学森林资源与环境学院,江苏南京210037

出　　处：《浙江林学院学报》2003年第4期429-433,共5页Journal of Zhejiang Forestry College

基　　金：浙江省科学技术厅重大招标项目(0211025);浙江省自然科学基金重大项目(ZA0208);杭州市科技局重大攻关项目(2002112A12)

摘　　要：建立山核桃RAPD反应优化体系是进行山核桃遗传多样性分析的前提。通过对影响PCR扩增结果的主要因子的组合研究,确定了山核桃Caryacathayensis的最适反应体系和扩增程序,即在20μL反应体系中,含2 5mg·L-1(50ng)模板,2 0μL10×Buffer,16 67pmol·s-1TaqDNA聚合酶;各0 2mmol·L-1dNTPs,3 0mmol·L-1MgCl2,0 3μmol·L-1引物。扩增程序为:94℃预变性300s,94℃变性30s,38℃退火30s,72℃链延伸90s,38次循环,72℃后延伸420s。The optimized system used in RAPD reaction of Carya cathayensis must be established before analying the genetic diversity of Carya cathayensis.It is necessary to explore the reaction conditions and system.The optimal reaction mixture and amplification procedure of RAPD in Carya cathayensis were studied.The result showed that each 20 μL amplification reaction solution was consisted of 2.5 mg·L~ ( -1) (50 ng)template DNA,2.0 μL 10×Buffer,16.67 pmol·s~ ( -1) Taq DNA polymerase,each 0.2 mmol·L~ ( -1) dNTPs,2.4 mmol·L~ ( -1) MgCl_2,0.15×10~ ( -3) mmol·L~ ( -1) primer.The PCR amplification program is predenature at 94 ℃ for 300 s,followed by denature at 94 ℃ 30 s,annealing 38 ℃ for 30 s,extension 72 ℃ for 90 s,cycling 38 times,last extension 72 ℃ 420 s.[Ch,5 fig.2 tab.6 ref.]

关 键 词：林木遗传育种学 山核桃 随机扩增多态性DNA(RAPD) 反应体系 优化 

分 类 号：S718.46[农业科学—林学]