重组SARS冠状病毒刺突蛋白的表达和分离纯化  

Expression and Purification of Recombinant SARS Coronavirus Spike Protein

作　　者：俞浩[1] 杨勇[1] 张伟[1] 谢幼华[2] 秦峻[2] 汪垣[2] 郑华宝[1] 赵国屏[1] 杨晟[1] 姜卫红[1] 

机构地区：[1]中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所,上海200032 [2]中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所,上海200031

出　　处：《生物化学与生物物理学报》2003年第8期774-778,共5页

基　　金：中国科学院抗SARS科研基金;中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所所长基金资助项目~~

摘　　要：SARS冠状病毒的感染能引发人的严重急性呼吸综合征。根据对其他种类冠状病毒的研究结果 ,刺突(spike)蛋白 (S蛋白 )是病毒的主要表面抗原 ,重组S蛋白可用于临床诊治 ,疫苗制备和结构生物学研究。SARS病毒S蛋白基因被分段和完整地克隆到不同的细菌表达载体进行了表达。通过宿主菌的选择和条件的优化 ,其中75 1～ 192 5bp、2 0 0 5～ 3410bp、1～ 192 5bp、32～ 36 5 9bp片段及全长 1～ 376 8bpDNA都在大肠杆菌中实现了高效表达 ,表达量分别占菌体蛋白质的 35 %、34%、2 4 %、17%和 5 % ,并经亲和层析得到了部分纯化。纯化后的蛋白质将用于诊断试剂和结构生物学研究。A novel coronavirus (SARS coronavirus, SARS CoV) was discovered in association with cases of severe acute respiratory syndrome (SARS) recently. The first step in coronavirus infection is binding of the viral spike protein to certain receptor on host cells. The spike protein is the main surface antigen of the coronavirus and there should be antibodies against spike protein in patients' serum. Thus, to develop and expression protein fragment from spike protein gene are the purposes of this experiment. Partial spike gene fragments (751～1925 bp, 2005～3410 bp, 1～1925 bp and 32～3659 bp) and its intact gene were cloned into pET32 or pGEX vectors, and transformed into competent Escherichia coli BL21(DE3) (pLysS), respectively. 63, 78, 98, 160 and 164 kD fusion proteins were successfully expressed with amounts of 35%, 34%, 24%, 17% and 5% of total cell protein. The soluble parts of the cell crude extract were then partially purified by GST affinity chromatography.

关 键 词：严重急性呼吸综合症 冠状病毒 刺突蛋白 表达 SARS 

分 类 号：R373[医药卫生—病原生物学]