生物质谱结合IMAC亲和提取和磷酸酶水解分析蛋白质磷酸化修饰  

Analysis of Protein Phosphorylation by Combination of IMAC, Phosphatase with Biological Mass Spectrometry

作　　者：王京兰[1] 张养军[1] 蔡耘[1] 李蕾[1] 刘尚义[1] 杨何义[1] 钱小红[1] 

机构地区：[1]军事医学科学院放射医学研究所,北京100850

出　　处：《生物化学与生物物理学报》2003年第5期459-466,共8页

基　　金：国家自然科学基金重大项目资助 (No .3 9990 60 0 );国家重点基础研究发展规划项目 ( 973计划 )资助 (No .G19980 5 12 13;No .0 0 1CB5 10 2 0 1);国家高技术研究发展计划 ( 863计划 )资助 (No .2 0 0 1AA2 3 3 0 3 1);国家自然科学基金资助项目 (No .2 0 2

摘　　要：蛋白质磷酸化是生物体内非常重要的翻译后修饰方式 ,对磷酸化蛋白质的分析及磷酸化位点的确定有助于理解与其相关的生物功能。基质辅助激光解吸 /电离飞行时间质谱和电喷雾 四极杆 飞行时间质谱这两种生物质谱仪在蛋白质鉴定和翻译后修饰分析中发挥着重要作用。固相金属亲和色谱可选择性亲和提取肽混合物中的磷酸肽 ,结合磷酸酶水解实验和基质辅助激光解吸 /电离飞行时间质谱分析可确定肽混合物中的磷酸肽 ,最后用电喷雾 四极杆 飞行时间串联质谱分析磷酸肽的序列 ,结合数据库检索确定磷酸化位点。Abstract Protein phosphorylation is the most important reversible post-translational modification in cells. Analysis of phosphorylated proteins and identification of their phosphorylation sites is helpful for understanding their biological functions. MALDI-TOF-MS and ESI-Q-TOF-MS play important roles in protein phosphorylation analysis. In this work, immobilized metal affinity chromatography (IMAC) was used to selectively enrich phosphopeptides from protein digest mixtures, and treatment of phosphopeptides with alkaline phosphatase was used to confirm the phosphorylation. Finally, the phosphorylation sites were determined by tandem mass spectrometry analysis and database searching.

关 键 词：生物质谱 磷酸化修饰 固相金属亲和色谱 IMAC 蛋白质 

分 类 号：Q518.1[生物学—生物化学]