应用噬菌体展示技术筛选丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4A结合蛋白  

Screening of binding protein of hepatitis C virus NS4A by phage display from human liver cDNA library

作　　者：钟彦伟[1] 成军[1] 张忠东[1] 杨艳杰[1] 李强[1] 董菁[1] 黄燕萍[1] 刘敏[1] 王建军[1] 

机构地区：[1]解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心,北京100039

出　　处：《解放军医学杂志》2004年第1期20-22,共3页Medical Journal of Chinese People's Liberation Army

基　　金：国家自然科学基金资助课题 (编号 3990 0 1 30 )

摘　　要：目的　筛选丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS4A结合蛋白 ,为HCV致病机制的研究探索新的途径。方法　应用噬菌体展示技术 ,以HCV非结构蛋白NS4A作为固相筛选分子 ,对T7噬菌体人肝细胞cDNA文库进行 5轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选过程 ,经噬斑的PCR扩增后 ,构建克隆载体 ,最后对所筛选克隆进行DNA序列测定和同源性分析。结果　噬菌体经富集后 ,从随机挑选的 12个克隆中得到 2个阳性克隆 ,成功构建了克隆载体。序列测定后经过序列同源性分析 ,确定了与HCV非结构蛋白NS4A结合的是肝细胞蛋白 丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)激活蛋白激酶 5 (MAPKAPK5 )。结论　用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到了HCV非结构蛋白NS4A的结合蛋白 ,为进一步研究HCV的致病机制奠定了良好的基础。Objective To screen the HCV NS4A binding protein. Methods By using HCV NS4A as a solidified selective molecule, the T7 select human liver cDNA library was biopanned and the positive clones were selected. After screening, the positive plaques was amplified and then cloned into the pGEM-Teasy vector. Two positive plaques were chosen for DNA sequencing. Results The binding protein of HCV NS4A was identified as mitogen-activated protein kinase (MAPK)-activated protein kinase 5 (MAPKAPK5) by BLAST. Conclusion This approach provides a new way for the study of the pathogenic mechanism of HCV infection.

关 键 词：噬菌体展示技术 C型肝炎样病毒属 病毒非结构蛋白质类 基因文库 

分 类 号：R512.63[医药卫生—内科学]