广宿主稳定表达载体pQMV和pGMP的构建  

Construction of Stable Shuttle Expression Vectors pQMV and pGMP

作　　者：胡玉琴[1] 张杰[1] 宋福平[1] 束长龙[1] 黄大昉[2] 

机构地区：[1]中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室,北京100094 [2]中国农业科学院生物技术研究所,北京100081

出　　处：《农业生物技术学报》2004年第2期202-205,共4页Journal of Agricultural Biotechnology

基　　金：国家自然科学基金青年基金(No. 39900004);国家重点基础研究发展规化(973)项目(No. 2001CB109005)资助。

摘　　要：以Eschedchia coli高效表达载体pET-29a为基础，将广宿主载体pUCP19中稳定的假单胞菌(Pseudomonas)质粒DNA复制子和自行分离克隆的荧光假单胞菌(P.fluorescens)P303组成型表达启动子PP303插入其中，分别获得了重组载体pQMV(4．6kb)和pGMP(5．6kb)。它们均含有假单胞菌和大肠杆菌复制子、荧光假单胞菌内源强启动子，以及包含8～11个限制性内切酶多克隆酶切位点；此外，载体pGMP还含有绿色荧光蛋白基因gfp作为辅助检测标记。连续培养和继代培养测定，这两种载体在荧光假单胞菌中的稳定性均为100％(120h)。The replicon of Pseudomonas plasmid DNA from pUCP19, and a new strong promoter PP303, cloned from Pseudomonas fluorescens P303 strain, were inserted into plasmid pET-29a, a high level expression vector of Escherichia coli. The recombinant shuttle expression plasmid pQMV(4.6 kb) and pGMP(5.6 kb) were obtained respectively. The vector pGMP containing gfp gene was especially available for detection and monitoring. The stability of the two expression vectors were 100%(120 h) in P303 strain of Pseudomonas fluorescens. Both recombinant vectors will be powerful for research on gene expression, regulation and construction of engineered strains of Pseudomonas.

关 键 词：绿色荧光蛋白基因 荧光假单胞菌 启动子 穿梭表达载体 稳定性 pQMV pGMP 

分 类 号：Q939.112[生物学—微生物学] Q78