丙肝病毒全基因组cDNA克隆侵染细胞培养体系的建立  

作　　者：姚相杰[1] 郭佳[1] 郑从义[1] 方呈祥[1] 屈三甫[1] 陈震球 李中红 李信墙 李卫云 

机构地区：[1]武汉大学生命科学学院病毒学教育部重点实验室,武汉430072 [2]广州中海潮生物技术有限公司,广州510010

出　　处：《科学通报》2004年第10期965-970,共6页Chinese Science Bulletin

摘　　要：以含有丙肝病毒全基因组cDNA的重组质粒(pHCV)为材料,通过基因转染、重组痘病毒辅助使之在HeLa细胞中表达HCV病毒体,建立了一种新的HCV体外细胞培养系统.采用RT-PCR,荧光定量RT-PCR,链特异性RT-PCR,免疫印迹,免疫电子显微镜和电子显微镜负染技术跟踪检测HCV的增殖效率,结果显示,该培养体系中有HCV正链RNA的合成和HCV结构蛋白、非结构蛋白的表达,并组装成直径约47nm的HCV病毒体,病毒体可被偶联有胶体金的抗HCV结构蛋白E2的单抗标记;该体系产生的HCV病毒体滴度达107基因拷贝/mL,远远高于病人血清中的HCV基因拷贝数,也高于迄今报道的任何一种HCV细胞培养体系的病毒滴度.检测结果证明,转染细胞裂解上清中的HCV病毒体可以感染肝癌细胞系Huh7,并在感染细胞中增殖和合成负链RNA中间体,病毒滴度达106基因拷贝/mL.

关 键 词：丙型肝炎病毒 全基因组 侵染性cDNA克隆 重组痘病毒 细胞培养体系 

分 类 号：R346[医药卫生—基础医学]