含佐剂疫苗中游离多糖含量离子色谱检测方法的开发及验证  

作　　者：陈丹 朱向国 余佳 郑佳 

机构地区：[1]北京智飞绿竹生物制药有限公司,北京100176

出　　处：《中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生》2024年第10期0059-0065,共7页

摘　　要：建立A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗(AC结合苗)和b型流感嗜血杆菌结合疫苗(Hib结合苗)游离多糖含量离子色谱检测方法,并进行验证。方法 两种疫苗的有效成分均为多糖-蛋白结合物,且添加铝佐剂对抗原进行吸附以增强免疫应答,AC结合苗添加氢氧化铝佐剂,Hib结合苗添加磷酸铝佐剂,由于佐剂会干扰游离多糖的检测,本实验首先采用加氢氧化钠溶液的方式进行解吸附去除佐剂,再采用冷酚沉淀法提取游离多糖,后对提取的游离多糖进行水解,AC结合苗中A群脑膜炎就球菌多糖的水解产物为6-磷酸葡萄糖胺(ManN-6-P),C群脑膜炎就球菌多糖水解产物为唾液酸(NANA),Hib结合苗中b型流感嗜血杆菌多糖的水解产物包含1个核糖、1个核糖醇(SN)和1个磷酸,对其中的核糖醇进行检测。测定水解产物的含量从而计算各群游离多糖含量。摸索优化实验条件,方法 进行专属性、准确度、重复性、中间精密度、线性和耐用性的验证。结果 水解产物6-磷酸葡萄糖胺、唾液酸和核糖醇的保留时间与标准品的保留时间的RSD均在0.1%~0.3%之间,专属性良好;样品的加标回收率均在99.2%~114.3%之间,准确度符合要求;三种游离多糖各6次检验结果的RSD在0.5%~5.4%,方法 具有良好的重复性;两名实验人员各做3组6-磷酸葡萄糖胺、唾液酸和核糖醇标准溶液,6次检验结果的RSD在0.71%~1.37%之间,中间精密度良好;6-磷酸葡萄糖胺、唾液酸和核糖醇浓度在1~20μg/ml之间具有良好的线性关系,相关系数均大于0.99。结论 初步建立了准确、稳定的AC结合苗和Hib结合苗的游离多糖含量检测方法。

关 键 词：高效阴离子交换色谱-脉冲安培法 解吸附 游离多糖含量 分析方法验证 

分 类 号：R914[医药卫生—药物化学]