高频等位基因HLA-A* 1101重链胞外域-BSP融合蛋白原核表达载体的构建及表达鉴定  

Construction and expression of the prokaryotic expression vector for high frequency allele HLA-A* 1101 heavy-chain ectodomain fused with BSP

作　　者：李丰耀[1] 徐丽慧[2] 迟晓云[1] 查庆兵[1] 贾仟涛[1] 何贤辉[1] 

机构地区：[1]暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心,广东广州510632 [2]暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所,广东广州510632

出　　处：《暨南大学学报（自然科学与医学版）》2006年第4期509-514,共6页Journal of Jinan University(Natural Science & Medicine Edition)

基　　金：国家自然科学基金(30230350;30371651和30572199)资助项目

摘　　要：目的:构建HLA-A*1101重链胞外域羧基端融合生物素化酶B irA底物肽(BSP)的融合蛋白(HLA-A11-BSP)原核表达载体,并在大肠杆菌中表达该融合蛋白。方法:以RT-PCR法扩增并克隆HLA-A*1101重链基因的cDNA,以PCR方法构建HLA-A11-BSP的表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并以免疫印迹法进行鉴定。结果:从HLA-A2阴性的供者外周血单个核细胞中克隆到HLA-A*1101重链基因的cDNA,以此cDNA为模板,将编码HLA-A*1101重链胞外域1~276序列与编码BSP的序列融合,构建HLA-A11-BSP融合蛋白表达载体,重组质粒经测序验证。融合蛋白在BL21(DE3)中诱导后获得高效表达,约占菌体总蛋白的20%;其相对分子质量约为35 000,与理论值一致。免疫印迹分析显示表达产物主要存在于包涵体中,上清液中几乎无任何产物存在。结论:成功构建表达HLA-A11-BSP融合蛋白的原核表达载体,该融合蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式获得高水平表达。Aim: To construct the prokaryotic expression vector for HLA-A*1101 heavy chain ectodomain fused with a BirA substrate peptide(BSP) at its carboxyl terminus and express the fusion protein in Escherichia coli(E.coli).Methods: The cDNA of the heavy chain gene of HLAA*1101 was cloned by RT-PCR from HLA-A2-donors and verified by DNA sequencing. An expression vector,which encoded the ectodomain of HLA-A*1101 fused with BSP at the carboxyl terminus,was constructed by PCR with the cloned cDNA as a template.The reco...

关 键 词：免疫学 高频等位基因HLA-A*1101 生物素化酶底物肽 融合蛋白 原核表达 包涵体 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]