重组鸡Igλ轻链真核细胞分泌表达及其单克隆抗体的制备与鉴定  

Secretable eukaryotic expression of recombinant chicken Igλ and preparation of monoclonal antibodies against chicken Igλ

作　　者：张红[1] 张改平[1] 章金刚[2] 杨艳艳[1] 易明林[1] 李姣[1] 韩鸿鹏[3] 

机构地区：[1]河南省农业科学院,河南郑州450002 [2]军事医学科学院,北京100850 [3]河南教育学院,河南郑州450003

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2008年第3期260-262,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家重点基础研究发展计划(973)资助项目(2005CB523200);国家自然科学基金资助项目(30571388);河南省基础与前沿项目资助(072300430110)

摘　　要：目的:构建重组载体pcDNA-λ并在COS7细胞分泌表达鸡Igλ轻链,制备抗鸡Igλ轻链的单克隆抗体(mAb)。方法:PCR扩增带有信号肽的鸡Igλ轻链基因,限制性酶切消化后,定向克隆于真核表达载体pcDNA3,构建具有6×His标签、分泌表达的重组载体pcDNA-λ。重组载体转染COS7细胞后,SDS-PAGE分析真核表达载体pcDNA-λ在COS7细胞的分泌表达。用2×106个雏鸡B淋巴细胞免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞融合,分别采用细胞免疫荧光和间接ELISA筛选阳性杂交瘤克隆。结果:成功构建分泌表达鸡Igλ轻链的重组载体,SDS-PAGE分析表明在COS7细胞上清有目的蛋白的分泌表达。杂交瘤细胞经筛选与鉴定,获得2株分泌抗鸡Igλ轻链mAb的杂交瘤细胞株,Western blot检测到该mAb对重组鸡Igλ轻链的反应性。结论:构建了重组表达载体pcDNA-λ并在COS7细胞上清分泌表达了重组鸡Igλ轻链。并用淋巴细胞杂交瘤技术成功筛选出抗鸡Igλ轻链mAb。为深入研究鸡Igλ轻链的结构与功能奠定了基础。AIM:To construct the eukaryotic expression vector for chicken Igλ light chain,to express it on COS7 cells and to prepare the monoclonal antibodies against chicken Igλ.METHODS:The cDNA of chicken Igλ light chain with signal peptide sequence was amplified and then inserted into eukaryotic expression plasmid pcDNA3 after double enzyme cutting.The constructed recombinant vector was transfected into COS7 cells by lipofectamin and the secretable eukaryotic expression of chicken Igλ light chain was verified by Wes...

关 键 词：鸡Igλ轻链 pcDNA-λ COS7细胞 真核分泌表达 单克隆抗体 

分 类 号：S852.4[农业科学—基础兽医学]