ORF3基因缺失对猪圆环病毒Ⅱ型感染复制能力的影响  

Influence of ORF3 gene deletion on infecting and replicating ability of porcine cirovirus type 2

作　　者：杨晓农[1] 郭万柱[1] 徐志文[1] 王新[2] 殷华平[3] 王小玉[1] 龙虎[4] 

机构地区：[1]四川农业大学动物生物技术中心,四川雅安625014 [2]西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌712100 [3]韶关学院英东生物工程学院,广东韶关512005 [4]西南民族大学生命科学与技术学院,四川成都610041

出　　处：《中国兽医学报》2008年第9期991-995,共5页Chinese Journal of Veterinary Science

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30500019);教育部长江学者和创新团队发展计划资助项目(IRTO555)

摘　　要：设计1对特异性引物AF-P1/AF-P2,从疑似PCV2感染的病料中扩增获得1 767 bp的PCV2全基因组(命名为PCV2-CD),克隆至pMD18-T Simple载体构建重组质粒pTS-PCV2-CD。序列分析表明:PCV2-CD与GenBank中公布的12个PCV2毒株间的同源性高达95.0%~100%。用NcoⅠ酶切pTS-PCV2-CD获得4 459 bp线性目的DNA片段,补平CATG 4个碱基、连接环化构建ORF3基因插入缺失重组质粒pTS-PCV2-CD-C并测序。用SacⅡ酶切pTS-PCV2-CD-C,回收1 771 bp线性目的片段,体外连接环化构建了ORF3基因缺失突变毒株mPCV2-C。PCR-RFLP检测表明,在脂质体转染法转染mPCV2-C、培养并盲传4代的IBRS-2细胞中(PCV1阴性),特异性检测到mPCV2-C的DNA;电镜观察发现,在盲传6代的IBRS-2细胞胞核内观察到突变毒株的病毒颗粒。试验结果表明:ORF3基因缺失突变毒株mPCV2-C具有感染性,能够在IBRS-2细胞中复制增殖,证实ORF3基因不是PCV2复制的必需基因。Using a pair of specific primers AF-P1 and AF-P2,the complete genome of porcine circovirus type 2(PCV2) was amplified from a pathological sample suspected PCV2 infection(named PCV2-CD),which was cloned to pMD18-T Simple vector to construct recombinant plasmid pTS-PCV2-CD.The sequence analysis showed that,compared with the other twelve PCV2 strains published in GenBank,the homology of PCV2-CD was high up to 95.0%-100%.pTS-PCV2-CD was digested by NcoⅠto obtain the target linear DNA fragment with 4 459 bp,whic...

关 键 词：猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2) ORF3基因 基因功能 

分 类 号：S852.65[农业科学—基础兽医学]