重组腺病毒载体vAd-tat的构建及其在细胞中的表达  

Construction of replication-deficient recombinant adenoviruses containing HIV-1 tat gene and its expression in 293 cells

作　　者：王路[1,2] 白雪[1,2] 刘红亮[1,2] 张高红[1] 郑永唐[1] 

机构地区：[1]中国科学院昆明动物研究所动物模型和人类疾病机理重点实验室分子免疫药理学实验室 [2]中国科学院研究生院

出　　处：《免疫学杂志》2009年第2期168-172,共5页Immunological Journal

基　　金：国家自然科学基金(30471605);云南省科技攻关计划(2004NG12);中国科学院知识创新工程重要方向(KSCX1-YW-R-15);“西部之光”人才计划资助

摘　　要：目的构建含HIV-1tat基因重组腺病毒,观察在不同细胞中外源蛋白Tat的表达,作为DC抗HIV疫苗的基础。方法通过PCR扩增,获得HXB2tat的cDNA片段,定向克隆入腺病毒转移载体pTrack-CMV,线性化后转化含有腺病毒骨架pAd-easy-1的大肠杆菌BJ5183,获得同源重组的质粒prAd-tat,PacⅠ酶切纯化后转染293细胞,包装成具有感染力的复制缺陷型重组腺病毒vAd-tat。结果经PCR、酶切及DNA序列测定,插入片段大小、方向正确,获得具有感染力的含有HIV-1tat基因的重组腺病毒;通过Western blot方法检测,重组腺病毒在293细胞中表达出Mr为15000的蛋白。结论成功构建了含有HIV-1tat基因的腺病毒,并观察到该基因在细胞中的表达。Objective To construct replication-deficient recombinant adenoviruses containing HIV-1 tat gene and express Tat protein in various cells for establishing a foundation of DC vaccine.Methods HIV-1 tat gene fragment was obtained by PCR and cloned into shuttle vector pTrack-CMV,and then transformed into E.coli BJ5183 containing adenoviruses backbone pAd-easy-1 after linearization at a Pme Ⅰ site.The resulting recombinant plasmids,designated prAd-tat,were digested by Pac Ⅰ and then transfected into packaging cel...

关 键 词：HIV-1 TAT 293细胞 腺病毒 基因克隆 

分 类 号：R392[医药卫生—免疫学]