血清透明质酸HA定量检测的新方法  

作　　者：马岚[1] 赵力生[1] 李春华[1] 邓双胜[1] 王泽华[1] 袁航[1] 

机构地区：[1]云南大学单克隆抗体工程技术中心云南省昆明市 650091 云南大学单克隆抗体工程技术中心云南省昆明市 650091 云南大学单克隆抗体工程技术中心云南省昆明市 650091 云南大学单克隆抗体工程技术中心云南省昆明市 650091 云南大学单克隆抗体工程技术中心云南省昆明市 650091 云南大学单克隆抗体工程技术中心云南省昆明市 650091

出　　处：《世界华人消化杂志》2000年第z1期73-,共1页World Chinese Journal of Digestology

基　　金：云南省科委应用基础研究基金资助课题,No.96C010M

摘　　要：目的建立一种可用于血清透明质酸HA定量检测的新方法.方法采用透明质酸HA纯品按常规方法免疫兔子,经心脏采血和亲和纯化获得抗HA多抗.采用常规单抗杂交瘤技术免疫小鼠,经细胞融合、阳性细胞株筛选及单克隆化,最终获取阳性HA单抗细胞株.采用腹水法制取HA单抗,蛋白A亲和株纯化抗体.利用上述自制的高质量的抗HA单抗和多抗,建成HA定量检测双抗体夹心酶联免疫检测法:以HA单抗包被酶标板,封闭洗涤后加入HA纯品及待测样品,放置洗涤后加入HA多抗,放置洗涤后再依次加入酶标二抗羊抗免IgG-HRP和底物OPD显色读数.并用此新方法来检测HA纯品及其不同期肝纤维化大鼠血清中HA的浓度.结果经心脏采血和纯化后,获得80mL抗HA多抗血清,其抗体的含量为14.35g/L,亲和常数为1×10-7mol-1,效价达1×10-7.共做了三批细胞融合,三批的融合率分别为:18.5%(71/384),22.1%(85/384),60.2%(231/384),总融合率为33.6%(387/1152).各批的阳性率分别为:21.1%(15/71),23.5%(20/85),12.1%(28/231),总阳性率为16.3%(63/387).从这些阳性杂交瘤细胞株中共选出了6株阳性较高的,克隆了其中两株,2C3F2,2C3B8.并制备了2C3F2的腹水.经纯化后,其含量、效价和亲和常数分别为:7.88%,1×10-5和1.97×10-6mo1-1.以效价为10-3HA单抗包被酶标软板,并以加入10-3浓度的HA多抗来组配建立HA定量检测法时,其光吸收值A492nm最高.用此组配来检测HA纯品时,其检测精度至少在1ng,其灵敏度与以往检测的方法相比相同或相近.用此法来检测大鼠肝硬变病程中血清HA的浓度变化,结果表明在第1,3,6,9及12wk时的血清HA含量分别为0.21μg@L-1,7.98μg@L-1,20.10μg@L-1,229.73μg@L-1和324.74μg@L-1.结论利用只针对HA的高特异高敏感性抗HA单抗和多抗建立起来的双抗体夹心法比起现有的HA放免或酶免试剂盒更为简便、经济、快速和灵敏准确.若经进一步完善,是有可能发展成为一种用于血清HA

关 键 词：透明质酸 肝硬化 抗体 双抗体酶联免疫检测法 免疫酶技术 

分 类 号：R57[医药卫生—消化系统]