同位素稀释质谱法测定α-淀粉酶的蛋白质含量  

Quantification of Protein of α-Amylase by HPLC Isotope Dilution Mass Spectrometry

作　　者：武利庆 谢宝民[1] 王晶[1] 

机构地区：[1]中国计量科学研究院,北京,100013 中国计量科学研究院,北京,100013 中国计量科学研究院,北京,100013

出　　处：《计量学报》2007年第z1期290-294,共5页Acta Metrologica Sinica

基　　金：国家自然科学基金(20605017);中国计量科学研究院青年基金(TGQ0623)

摘　　要：利用同位素稀释质谱法测定了盐溶液中α-淀粉酶的蛋白质含量.在含有α-淀粉酶的盐溶液中加入适量的苯丙氨酸标记物后进行酸水解,水解后的氨基酸经过高效液相色谱(HPLC)分离,质谱检测采用选择离子模式,分别监测苯丙氨酸(m/z=166)和标记苯丙氨酸(m/z=174)的离子,根据苯丙氨酸的含量计算α-淀粉酶的蛋白质含量,因此在测定中只需要氨基酸的标准物质就可以保证蛋白质含量测定结果的溯源性.实验中优化了酸水解的时间,采用HPLC-MS和MALDI-TOF质谱证明了淀粉酶已完全水解,并对测定结果的不确定度进行了评估.该方法可以准确测定溶液中蛋白质含量,并可用于蛋白质含量标准物质的定值.

关 键 词：计量学 蛋白质 Α-淀粉酶 高效液相色谱 同位素稀释质谱法 

分 类 号：TB99[一般工业技术—计量学]