应用抑制性消减杂交技术克隆和筛选PS1TP5反式激活相关基因  

Screening and cloning of the PS1TP5 transactivation related genes by suppression subtractive hybridization

作　　者：张健康[1] 刘春燕[2] 成军[3] 郭江[3] 赵龙凤[1] 洪源[3] 毛羽[3] 

机构地区：[1]山西医科大学第一医院消化内科,山西太原030001 [2]空军太原干休所卫生所 [3]北京地坛医院传染病研究所

出　　处：《胃肠病学和肝病学杂志》2009年第11期1033-1036,共4页Chinese Journal of Gastroenterology and Hepatology

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30371288);北京市自然科学基金项目(5042024)

摘　　要：目的构建乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活基因5(PS1TP5)的反式激活相关基因差异表达的cDNA,克隆PS1TP5蛋白反式激活相关基因。方法以PS1TP5表达质粒pcDNA3.1(-)-myc-his(A)-PS1TP5转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)-myc-his(A)为对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并合成cDNA,经RsaⅠ酶切后将实验组cDNA分成两组,分别衔接两种不同接头,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次PCR反应,产物与T/A克隆载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆经PCR鉴定后进行测序及同源性分析。结果成功构建人PS1TP5蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA。扩增后得到70个200～1 000 bp插入片段的克隆,随机挑选其中30个插入片段测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得24种编码基因,其中1个为未知功能的新基因,电子拼接后命名为HBV PS1TP5TP1(乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活蛋白5反式激活蛋白1),GenBank注册号DQ487761。结论筛选到的cDNA全长序列,包括一些与细胞生长调节、物质代谢和细胞凋亡密切相关的蛋白编码基因。PS1TP5与人类免疫调节、物质代谢、信号转导、肝纤维化形成、肿瘤发生发展有密切关系。为进一步研究HBV前-S1蛋白的功能提供了新的线索。Objective To clone and identify human genes PS1TP5 transactivation related genes by constructing a cDNA subtractive library with suppression subtractive hybridization(SSH). Methods Suppression subtractive hybridization and bioinformatics technique were used for screening and cloning the target genes transactivated by PS1TP5 protein.The mRNA was isolated from HepG2 cells transfected pcDNA3.1(-)-myc-his(A)-PS1TP5 and pcDNA3.1(-)-myc-his(A) empty vector,respectively,and SSH method was employed to analyze the d...

关 键 词：乙型肝炎病毒 前-S1蛋白 抑制性消减杂交 

分 类 号：R512.62[医药卫生—内科学]