禽流感病毒M2e特异性多肽ELISA检测方法的建立  

作　　者：郑其升[1] 徐公豹[1] 邓碧华[1] 何家惠[1] 侯继波[1] 

机构地区：[1]江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014

出　　处：《畜牧与兽医》2010年第3期77-81,共5页Animal Husbandry & Veterinary Medicine

基　　金：江苏省高科技计划资助项目(BG2002006324);江苏省农业科学院博士后基金项目(08813110630)

摘　　要：本研究人工合成禽流感病毒H5N1亚型M2蛋白的膜外区(M2e),并偶联至半抗原载体血蓝蛋白(KLH),免疫SPF鸡,共免疫3次,每次间隔两周。所获得的阴阳性血清用于ELISA方法的建立,通过方阵滴定确定了人工合成的23肽包被96孔ELISA板的最佳浓度为5μg/mL;1%BSA为封闭液,37℃封闭3 h;被检测血清的最佳稀释度为1∶400,一抗反应时间为37℃,45 min;二抗反应时间为37℃30 min;选用TMB为底物,显色15 min,用2 mol/L H2SO4为终止液为检测血清中抗M2e抗体滴度奠定基础。根据建立的ELISA方法,检测3次免疫2周后的SPF鸡血清中抗M2e抗体,血清开始1∶100倍稀释之后做倍比稀释,测得平均滴度分别为1∶13 500和1∶20 500。

关 键 词：禽流感病毒 M2e 多肽 间接ELISA 

分 类 号：S855.3[农业科学—临床兽医学]