抗结核分枝杆菌培养滤液蛋白10的新型单克隆抗体的制备及其临床应用  

Preparation and clinical application of a novel monoclonal antibody against Mycobacterium tuberculosis culture filtrate protein 10

作　　者：冷建杭 寿成珉[2] 吴志刚[3] 卓广超 王克义 沈俊娅 黄晟 

机构地区：[1]杭州市第一人民医院(南京医科大学附属杭州医院)中心实验室,610061 [2]杭州市红十字会医院内分泌科 [3]浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室 [4]杭州市第一人民医院(南京医科大学附属杭州医院)呼吸科,310006

出　　处：《中华临床感染病杂志》2013年第1期23-26,共4页Chinese Journal of Clinical Infectious Diseases

基　　金：国家“十二·五”传染病防治重大专项课题(2012ZX10001-003)杭州市科技发展计划项目(20100633B01)

摘　　要：目的 制备抗结核分枝杆菌培养滤液蛋白10(CFP-10)特定抗原肽的单克隆抗体,为建立结核病临床早期诊断的免疫学方法奠定物质基础.方法 设计并合成结核分枝杆菌CFP-10第53 ～ 66位氨基酸(14肽AAVVRFQEAANKQK)作为特定的抗原肽序列,经免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,经酶联免疫吸附试验(ELISA)检测、多次有限稀释亚克隆建立能稳定分泌抗结核分枝杆菌特异抗原肽单克隆抗体的杂交瘤细胞系,纯化该单克隆抗体,进行免疫球蛋白亚型分析,并鉴定分析该单克隆抗体在蛋白质免疫印迹法(Western blotting)、免疫沉淀法和ELISA检测中的应用效果.共检测结核分枝杆菌培养上清样本38份,非结核分枝杆菌培养上清样本20份,结核性胸水样本32份,非结核性胸水样本24份以及健康对照血清样本20份.结果 单克隆抗体免疫球蛋白亚型分析显示该杂交瘤细胞系产生的抗体类型为IgG1和κ型.该抗结核分枝杆菌CFP-10特异性单克隆抗体可成功用于Western blotting和免疫沉淀法分析.ELISA定量检测显示,该特异性抗体检测结核分枝杆菌的敏感性为78.6％ (55/70),特异性为92.2％ (59/64).结论 CFP-10特定抗原肽单克隆抗体用于结核分枝杆菌检测有较高的敏感性和特异性,可用于结核病的早期诊断.

关 键 词：分枝杆菌 结核 培养滤液蛋白10 抗原肽 抗体 单克隆 免疫学技术 

分 类 号：R[医药卫生]