重组猪IFN-λ3原核表达及其活性分析  

Expression of recombinant porcine interferon-λ3 in E.coli and the anti-virus activity analysis

作　　者：周恒[1,2] 沈海燕[2] 郭鹏举[2] 张春红[2] 张建峰[2] 刘志成[2] 孙俊颖[2] 李玉谷[1] 

机构地区：[1]华南农业大学兽医学院,广东广州510640 [2]广东省农业科学院动物卫生研究所,广东广州510640

出　　处：《中国兽医学报》2015年第1期86-90,共5页Chinese Journal of Veterinary Science

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31302101);广东省农业科学院院长基金资助项目(201213);广东省农业科学院兽医研究所所长基金资助项目(2011SZJJ007);广东省科技计划资助项目(2011B050700007;2012A020602094)

摘　　要：应用RT-PCR技术从多聚肌苷酸多聚胞苷酸(poly(I∶C))刺激的ST细胞中扩增猪干扰素-λ3(PoIFN-λ3)基因。基因序列分析表明,PoIFN-λ3基因全长为588bp,与绵羊IFN-λ3基因(XM_004015683)的同源性最高(87.6%);分子遗传进化树分析表明猪IFN-λ3与牛、绵羊亲缘关系最近,与马、人、黑猩猩和鸡的亲缘关系次之。将PoIFN-λ3成熟肽序列定向插入pET-32a载体,转化宿主菌Rosetta gami B,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting检测分析表明,PoIFN-λ3基因获得表达,重组蛋白大小为32 000,以包涵体形式存在。重组蛋白经变性、纯化、复性后,用细胞病变抑制法在MDBK/VSV系统上进行抗病毒活性的测定。结果显示,复性后重组蛋白的含量约为1g/L,抗水泡性口炎病毒(VSV)活性达到2×103 U/mg,表明重组poIFN-λ3具有较高的抗病毒作用。Porcine IFN-λ3(λ3-interferon)gene was amplified by using RT-PCR from ST cells stimulated with poly(I∶C)and subcloned into pET-32 aexpression vector,transformed into host bacteria Rosetta gami B.The IFN-λ3gene contained a ORF of 588 bp in length,which shared87.6% sequence identities with that of sheep IFN-λ3(XM_004015683).Phylogenetic analysis showed that the porcine IFN-λ3was species-specific.SDS-PAGE analysis and Western-blot analysis showed that recombinant porcine IFN-λ3was about 32 000 expressed by IPTG-induction,and existed in inclusion bodies.Porcine IFN-λ3was purified by Ni-NTA affinity chromatography.After refolding,IFN-λ3possessed a anti-vesicular stomatitis virus activity at 2×103 U/mg.

关 键 词：猪IFN-λ3 原核表达 抗病毒活性 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学] S828[农业科学—畜牧学]