基因重组幽门螺杆菌HspA—Zot融合蛋白质口服疫苗的研制  

作　　者：李明峰[1] 程军[1] 何志勇[2] 熊伟民[1] 吴祥甫[2] 

机构地区：[1]中国人民解放军第四五五医院消化科，上海200052 [2]中国科学院上海生物化学研究所，上海200032

出　　处：《中华腹部疾病杂志》2003年第8期547-551,562,共6页Chinese Journal of Celiopathy

摘　　要：目的制备幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位(HspA)和霍乱弧菌封闭小带毒素(Zot)的重组融合蛋白质HspA—Zot(HZ)；观察融合蛋白HZ经口服免疫后在小鼠小肠内的吸收情况；观察HZ经口服免疫后诱发小鼠产生的特异性免疫应答反应。方法①用PCR方法扩增HspA和Zot两个目的基因片段，将它们分别克隆至pSK(+)质粒上，然后插入含T7启动子pET一28a(+)的表达载体中，构建含双基因的表达质粒pET—hz，转化E，coli BL21(DE3)，经IPTG诱导表达高效的融合蛋白HZ；②融合蛋白经镍离子柱纯化、复性后，与HspA重组蛋白质共同标记同位素^125I，经小鼠灌胃实验观察其在小鼠小肠内的吸收情况。结果①经测序，hspA-zot(hz)融合基因片段由1 575bp组成，为编码515个氨基酸残基的多肽。经SDS—PAGE检测发现，融合基因表达的蛋白质相对分子质量(M)r约为65×10^3。②标记同位素^125I的HZ和HspA，经小鼠灌胃实验观察不同时间段的吸收，情况，结果发现在5～10min时间段，HZ组出现吸收峰值，约为对照组的8．65倍(P<0．001)，且吸收峰值时问明显提前。结论融合蛋白质HZ经口服后可以在小鼠小肠内迅速被大量吸收，经口服免疫后可以刺激机体产生较高滴度特异性抗体。HZ可以作为预防和治疗幽门螺杆菌感染的候选口服疫苗株。

关 键 词：基因重组 幽门螺杆菌 热休克蛋白A亚单位 霍乱弧菌封闭小带毒素 融合蛋白质 口服疫苗 免疫应答 

分 类 号：R378.2[医药卫生—病原生物学] R392[医药卫生—基础医学]