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机构地区:[1]北京输血研究所,北京100850
出 处:《中国生物制品学杂志》2005年第1期29-32,共4页Chinese Journal of Biologicals
摘 要:目的 利用DNA改组技术大幅度提高抗凝血酶Ⅲ (AT -Ⅲ )的生物活性。方法 采用RQ1DNaseⅠ不完全酶解ST -Ⅲ基因 ,产生长度为 5 0~ 10 0bp的随机片段 ,用低熔点胶回收。无引物PCR从小片段组装成大片段 ,通过有引物PCR得到正确大小的片段。线性化的质粒通过电转转入毕赤酵母GS115细胞。结果 获得了 5株高活性的克隆。结论 探索了在毕赤酶母进行DNA改组和筛选的方法和路线 ,成功进行了AT Ⅲ的改组 ,并为其它分子的改组提供借鉴。Objective To improve the bioactivity of antithrombin Ⅲ(AT-Ⅲ) significantly by DNA shuffling.Methods Digest the gene encoding ATⅢ partially with RQ1 DNase I to obtain random fragments at the lengths of 50-100 bp.Recover the fragments with 2% low melting point agarose gel.Reassemble the recovered small fragments into large fragments by self-priming PCR and obtain a fragment at correct length by reassemble-PCR.Insert the fragment into linearized plasmid pPIC9K and transform to P.pastoris GS115 cells.Results Five clones with high bioactivity were obtained.Conclusion An effective method for screening AT-Ⅲ with high bioactivity by DNA shuffling was developed.It provided a basis for the DNA shuffling of other molecules.
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