卡介苗菌MDP1基因敲除技术的研究  

作　　者：陈效友[1] 李传友[1] 马玙[1] 刘冲[2] 王敬慧[1] 张雪峰[2] 昌增益[2] 

机构地区：[1]北京市结核病胸部肿瘤研究所细菌免疫研究室101149 [2]清华大学生物系

出　　处：《结核病与胸部肿瘤》2004年第3期187-192,共6页Tuberculosis and Thoracic Tumor

摘　　要：目的 在卡介苗中建立基因敲除技术。方法 通过分别设计两绔引物，将靶基因[DNA结合蛋白1(MDP1)基因]通过聚合酶链反应(PCR)的方法扩增得到2个片段，分别插入pKO质粒中，构建得到基因敲除质粒pKO-MDPI，电转入至卡介苗菌株细胞内并与BCG基因组中的MDP1基因同源交换，筛选出敲除菌株，并测其生长曲线。结果 通过2次PCR筛选和1次蔗糖反筛选后得到的，并在含潮霉素培养基上不能生长的菌株为MDP1基因敲除菌株，对敲除菌株与原代菌株每12h测定其菌液的60hm处吸光度(A600)值，连续16d。两者的生长速度曲线呈现“S”形，两者之间的生长速度未见明显差别。结论 pKO质粒可作为基因敲除有用的质粒载体，MDP1基因可能是影响BCG生长的因素之一，但不是惟一的因素。

关 键 词：MDP 卡介苗 基因敲除技术 BCG 质粒 菌株 细胞内 靶基因 DNA结合蛋白 聚合酶链反应(PCR) 

分 类 号：R392.11[医药卫生—免疫学] R186[医药卫生—基础医学]