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检 索 范 例 :范例一: (K=图书馆学 OR K=情报学) AND A=范并思 范例二:J=计算机应用与软件 AND (U=C++ OR U=Basic) NOT M=Visual
作 者:臧晓南[1] 刘滨[1] 张学成[1] 茅云翔[1] 隋正红[1]
机构地区:[1]中国海洋大学海洋生命学院,青岛,266003
出 处:《高技术通讯》2005年第3期99-104,共6页Chinese High Technology Letters
基 金:国家高技术研究发展计划(863计划)
摘 要:采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法, 从牙鲆(Paralichthys olivaceus)脑垂体总RNA中扩增出编码牙鲆生长素(GH)成熟肽基因序列.重组至融合表达载体pGEX-4T-3中,构建成牙鲆GH基因融合表达载体pGEX-gh, 转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性克隆,IPTG诱导表达.经SDS-PAGE电泳显示在45kD处有特异的蛋白条带出现,该蛋白的表达量随诱导时间的延长而增加,3h达最高值,达到细胞总蛋白的18.3%.该融合蛋白在胞内主要以包涵体状态存在,经优化表达条件,成功地获得了可溶性的融合蛋白,经Glutathione Sepharase 4B凝胶纯化后用Western-blotting检测表明其为牙鲆生长激素,并通过酶联免疫吸附受体法证实其具有生物学活性.
关 键 词:融合表达载体 融合蛋白 大肠杆菌 IVIG Western-blotting 成熟肽基因 逆转录聚合酶链式反应 牙鲆 生长激素基因 GH基因
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