应用基因表达谱芯片技术筛选HBV前-S2蛋白反式调节基因  

作　　者：纪冬[1] 成军[1] 董菁[1] 刘妍[1] 王建军[1] 郭江[1] 

机构地区：[1]解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室，北京市100039

出　　处：《临床医药杂志》2005年第1期6-12,共7页

摘　　要：目的：乙型肝炎病毒(HBV)前-S2蛋白是由HBV—S基因编码的具有多种功能的蛋白质。前-S2蛋白的表达对于HBV感染肝细胞的基因表达谱具有显著影响。为了研究前-S2蛋白反式调节的靶基因，本实验应用基因芯片技术对于pcDNA3．1(-)和pcDNA3．1(-)-preS2分别转染的HepG2细胞的基因表达谱进行分析。方法：以含有HBV全基因组的质粒G．376—7(GenBank号：AF384371)作为模板，应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增前-S2蛋白编码基因片段，以常规的分子生物学技术构建表达载体pcDNA3．1(-)-preS2。以脂质体技术转染肝母细胞瘤细胞系HepG2，提取总mRNA，逆转录为cDNA．，与转染空白表达载体pcDNA3．1(-)的HepG2细胞进行DNA芯片分析并比较。结果：构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定，证实准确无误，提取高质量的总mR—NA并进行逆转录成为cDNA，进行DNA芯片技术分析。在1152个基因表达谱的筛选中，发现有42个基因表达水平显著上调，36个基因表达水平显著下调。结论：HBV的前-S2蛋白是一种反式激活因子，前-S2基因的表达对肝细胞基因表达谱有显著影响。

关 键 词：HBV 基因表达谱芯片技术 蛋白编码基因 转染 PCDNA3 反式调节基因 HepG2细胞 表达载体 基因表达水平 DNA序列 

分 类 号：R512.62[医药卫生—内科学] R735.7[医药卫生—临床医学]