血管基膜衍生多功能肽基因在毕赤酵母中的表达和活性鉴定  

作　　者：周虹[1] 戴文建[1] 彭淑平[2] 张曼 周建国[1] 董琳[1] 曹建国[1] 

机构地区：[1]南华大学肿瘤研究所，湖南衡阳421001 [2]中南大学肿瘤研究所，湖南长沙410078 [3]湖南湘铝公司医院，湖南湘乡411400

出　　处：《美国中华临床医学杂志》2005年第1期37-42,共6页American Journal of Chinese Clinical Medicine

摘　　要：目的利用PCR技术从含有目的基因的质粒pGEX-4T-1-VBMDMP获得带有snabⅠ和NotⅠ酶切位点并融合有GST的目的基因片段并测序鉴定。方法将PCR产物纯化、酶切、回收，克隆到pPIC9K栽体，转化入大肠杆菌DH5a扩增，用琼脂糖凝胶电泳、限制性内切酶酶切和DNA测序鉴定。BglⅡ线性新构建的表达载体pPIC9K-CST-VBMDMP，然后用原生质体转化法转化毕赤酵母细胞，并用pPIC9K空质粒也转入酵母细胞进行对照。用煮-冻-煮法裂解已转化有目的基因的毕赤酵母细胞，提取DNA并行PCR鉴定，获得阳性重组子，行多克隆筛选和表型鉴定。筛选His’Mut^8表型的转化子，在MGY液体培养基中30℃摇床培养，每24h从培养基中转移1mL培养基上清于-70℃保存，并保持培养瓶中培养基的量和培养基中甲醇0．5％的浓度不变。8d后行SDS—PACE检测表达的蛋白，用Glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化获得GST-VBMDMP融合蛋白；用凝血酶切割GDT—VBMDMP并分离获得VBMDMP。结果VBMDMP能够抑制鼠主动脉内皮细胞管状结构的形成；同时VBMDMP(10、6、2mg/kg)对小鼠Lewis肺癌原发瘤具有显著抑制作用(瘤重抑制率分别为96．6％、82．1％、61．2％)。VBMDMP(GST—VBMDMP 10、6、2mg／kg)对小鼠Lewis肺癌自发性肺转移具有显著抑制作用(自发性肺转移瘤结节抑制率分别为96．8％、87．9％、75．3％)。结论、VBMDMP能够抑制鼠主动脉内皮细胞管状结构的形成，并对小鼠Lewis肺癌原发瘤和肺转移具有明显的抑制作用。

关 键 词：活性鉴定 毕赤酵母 血管基膜 Lewis肺癌 主动脉内皮细胞 肽基因 多功能 SEPHAROSE 琼脂糖凝胶电泳 原生质体转化法 衍生 限制性内切酶 酵母细胞 抑制作用 自发性肺转移 目的基因 管状结构 PCR技术 DNA测序 PCR鉴定 阳性重组子 

分 类 号：R392.11[医药卫生—免疫学] R394.8[医药卫生—基础医学]