cpcB与CT融合蛋白表达质粒在大肠杆菌中的表达和纯化  

Construction and expression of cpcB-CT fused gene in E.coli

作　　者：王玉梅[1] 张学成[1] 周一江[1] 隋正红[1] 茅云翔[1] 

机构地区：[1]中国海洋大学海洋生命学院,青岛,266003

出　　处：《高技术通讯》2005年第5期62-66,共5页Chinese High Technology Letters

基　　金：国家高技术研究发展计划(863计划)

摘　　要：将人和鲑鱼嵌合型降钙素基因与藻蓝蛋白的β亚基基因相连,插入融合表达载体pGEX-4T-3中,转化大肠杆菌BL21.融合蛋白cpcB-CT基因在IPTG诱导下获得高效表达.超声破碎后,经SDS-PAGE分析,在48kD处有新增条,灰度扫描测定,过表达蛋白量占50%～60%,85%为包涵体.包涵体经变性、复性,过Glutathion-Sepharose-4B亲和吸附柱,获含有GST的融合蛋白,该蛋白经凝血酶消化和截留分离,获得纯化的融合蛋白cpcB-CT.Western blotting分析表明,产物具有与合成人降钙素相似的抗原决定簇部分;ELISA-受体法和大鼠降血钙试验表明,其具有降血钙作用.提示该融合蛋白可能具有良好的应用前景.

关 键 词：融合蛋白 大肠杆菌 表达质粒 纯化 SDS-PAGE分析 Western CT 融合表达载体 降钙素基因 抗原决定簇 藻蓝蛋白 高效表达 IPTG 超声破碎 包涵体 β亚基 蛋白量 过表达 吸附柱 GST 凝血酶 分析表 血钙 大鼠 受体 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学] S884.51[农业科学—特种经济动物饲养]