中国人促红细胞生成素基因组的克隆及其在COS-7细胞中的表达  

作　　者：黄利文 韩峰[1] 郑秋君[2] 马学军 陈广南[1] 李玉英[1] 蒋盘宏[2] 吴淑华[1] 侯云德[1] 

机构地区：[1]病毒基因工程国家重点实验室,北京100052 [2]卫生部北京生物制品研究所,北京100024

出　　处：《中国科学（B辑）》1994年第2期178-184,共7页Science in China(Series B)

摘　　要：本文利用PCR技术,从正常人胎肝染色体DNA库中分离克隆了长度分别为506bp,465bp的中国人促红细胞生成素(EPO)基因组片段。506bp基因片段包括外显子2(信号肽),内含子2和外显子3;465bp片段包括外显子4,内含子4和外显子5。通过在引物中设置的酶切位点将两个克隆片段进行了正确的拼接,从而得到了约1.0kb的EPO次全基因组片段,它包括除信号肽中第2,3,4位氨基酸外的所有编码区及两个内含子序列。 所克隆的次全EPO基因组插入表达载体pSV2-dhfr中的不同克隆位点,构建了3种不同的转移载体质粒,分别转染导入COS-7细胞后,3种转移载体质粒转染的细胞上清液都有明显的EPO活性。本工作证明仅含有内含子2,4序列,去除负调控区和氧敏感区序列的人次全EPO基因组可以在COS-7细胞中获得表达。

关 键 词：聚合酶链反应 基因表达 EPO 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]