猪圆环病毒2型cap基因与猪γ-干扰素基因双表达载体的构建及稳定表达  

作　　者：娄忠子[1] 杨彬[1] 兰喜[1] 李学瑞[1] 李志勇[1] 殷相平[1] 李宝玉[1] 柳纪省[1] 

机构地区：[1]中国农业科学院兰州兽医研究所传染病室 家畜疫病病原生物学国家重点实验室 农业部草食动物疫病重点开放实验室 农业部兽医公共卫生重点开放实验室,甘肃兰州730046

出　　处：《畜牧与兽医》2010年第12期67-72,共6页Animal Husbandry & Veterinary Medicine

基　　金：科研院所社会公益研究专项(2005DIB4J041)

摘　　要：通过PCR方法分别从含有猪圆环病毒2型(PCV-2)核衣壳蛋白(Cap)基因和猪,γ-干扰素(PoIFN-γ)基因的重组克隆载体pMD18-PCV-2Cap和pMD18-PoIFN-γ中扩增出Cap和PoIFN-γ的基因,将两基因亚克隆到真核表达载体pBudCE4.1中,构建重组真核双表达载体pBud-IFNPCV。重组质粒转染BHK-21细胞后进行Zeocin^(TM)抗性筛选建立细胞系,阳性细胞通过间接免疫荧光(IFA)和Western blot检测cap和PoIFN-γ在BHK-21细胞中的表达。结果显示,试验中筛选出1株Zeocin^(TM)抗性阳性BHK-21细胞,cap和PoIFN-γ均在该细胞中获得稳定高效表达,这将为猪圆环病毒病的防治提供新的方法。

关 键 词：猪圆环病毒病 CAP 干扰素基因 表达载体的构建 BHK-21细胞 重组 真核表达载体 间接免疫荧光 CAP 双表达载体 基因亚克隆 核衣壳蛋白 质粒转染 阳性细胞 抗性筛选 克隆载体 高效表达 PCR方法 Western 细胞系 

分 类 号：S8[农业科学—畜牧兽医]