抗人膀胱癌单克隆抗体重、轻链可变区基因体外扩增、克隆及序列分析  

Amplification,cloningandsequenceanalysisofthevariableregiongenesofmonoclonalantibodyagainsthumanbladdercarcinoma

作　　者：萧飒[1,2] 俞莉章[1,2] 顾征[1,2] 刘喜富[1,2] 郭应禄[1,2] 顾方六[1,2] 王勇[1,2] 陈艾[1,2] 宋海燕[1,2] 林晴[1,2] 黄华梁[1,2] 

机构地区：[1]中国科学院遗传研究所 [2]北京医科大学泌尿外科研究所

出　　处：《中华外科杂志》1996年第1期13-15,共3页Chinese Journal of Surgery

基　　金：卫生部科学研究基金

摘　　要：应用人工合成的两套引物，从分泌抗人膀胱癌特异性单抗的杂交瘤细胞ＢＤＩ－１中提取总ＤＮＡ。以之作模板，经ＰＣＲ法扩增出重、轻链可变区基因片段。将扩增产物分别插入ＰＵＣ１９质粒，筛选出阳性克隆，用链终止法进行ＤＮＡ序列测定。结果表明：重链可变区基因全长３６６ｂｐ，编码１２２个氨基酸，属于小鼠重链可变区的ＳｕｂｇｒｏｕｐＩＩ，由种系基因中的ＶＨ与Ｄ基因的Ｄｓｐ２．２及ＪＨ４基因重排而成；轻链可变区基因全长３２４ｂｐ，编码１０８个氨基酸，属于小鼠轻链可变区的ＳｕｂｇｒｏｕｐＩＶ，由种系基因中的Ｖκ与Ｊκ４基因重排而成。与已发表的抗体可变区基因序列比较。Wehavedesignedtwosetsofoligonucleotideprimerstoamplifytheimmunoglobulinheavy-andlight-chainvariableregiongenesfromgenomicDNAbythepolymerasechainreaction,PCR.ThegenomicDNAwasextractedfromhybridomaBDI-1cel,whichsecretsamonoclonalantibodyagainsthumanbladdercarcinoma.Theprimerscontainspecialrestrictionsitesthatalowthevariablere-giongenestobeeasytocloningforsequencingandexpression.ThePCRproductswereligatedtoplas-midPUC19.TherecombinantsweresequencedwithSanger′smethod.Itwasprovedthataful-lengthVHandVκgeneswas366and324basepairsrespectively.Comparaingwithotherpublishedse-quences,theVHgenewasamemberofmouseheavy-chainVHsubgroupIandoriginatedfromrear-rangementofVH,Dsp2.2andJH4;theVκgenewasVκsubgroupIVandfromVκandJκ4.Itwassug-gestedthatobtainedVHandVκgeneswerepotentitalyfunctionalgenesofthemonoclonalantibodya-gainsthumanbladdercarcinoma.

关 键 词：膀胱肿瘤 基因表达调节 单克隆抗体 轻链 

分 类 号：R737.140.3[医药卫生—肿瘤]