牦牛和双峰驼重组朊蛋白的原核细胞表达  

Prokaryotic expression of recombinant prion proteins of domestic yak and Camelus bactrianus

作　　者：吴润[1] 陈豪泰[1] 刘湘涛[1] 谢庆阁[1] 

机构地区：[1]中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室

出　　处：《中国兽医科学》2006年第1期1-6,共6页Chinese Veterinary Science

基　　金：农业部畜禽病毒学重点实验室基金项目(2002-01);兰州兽医研究所所长基金项目(2004-2005)

摘　　要：应用重组DNA技术构建了牦牛和双峰驼重组朊蛋白的4个表达载体，即pGEX-BoPrP（23～242）、pGEX—BoPrP（100～242）、pGEX—CaPrP（25～241）和pGEX—CaPrP（93～241），经转化E．coli BL21（DE3），成功地获得了重组菌E．coli BoPrP（23～242）、E．coli BoPrP（100～242）、E．coli CaPrP（25～241）和E．coli CaPrP（93～241），分别可表达大小约为50．2、41．7、49．9和42．4ku的融合蛋白。各重组菌经1．0mmol／L的IPTG于37℃诱导5～6h可产生占细菌总蛋白量30％～45％的融合蛋白。免疫印迹分析表明，除融合蛋白GST—BoPrP（100～242）外，GST—BoPrP（23～242）、GST—CaPrP（25～241）和GST—CaPrP（93～241）均可与抗牛单克隆抗体4C11反应，显示中国黄牛PrP^c与牦牛和双峰驼PrP^c具有共同的抗原成分。By using the recombinant DNA technology, four expression plasmids, pGEX-BoPrP（23-242）, pGEX-BoPrP（100-242）, pGEX-CaPrP（25-241） and pGEX-CaPrP（93-241）, of yak and camel recombinant prion proteins were constructed, After transforming E. coli BL21 （DE3）, the recombinant bacteria E. coli BoPrP（23-242） ,E. coli BoPrP （100-242） ,E. coli CaPrP（25-241） and E. coli CaPrP（93-241） were obtained. While the recombinant bacteria were induced by 1.0 mmol/L by IPTG at 37°C for 5 h to 6 h, the expectant fusion proteins with molecular sizes of approximately 50.2 ku, 41.7 ku, 49.9 ku and 42.4 ku were produced, respectively, and the expression products accounted for 30%-45% of overall bacterium protein. Western-blotting analysis confirmed that the fusion proteins, GST-BoPrP（23-242）, GST-CaPrP（25-241） and GST-CaPrP（93- 241） could react with the anti-bovine PrP monoclonal antibody 4Cll, with the exception of GST BoPrP（100-242）. Results showed that the yak PrP and the camel PrP shared the same antigen component as Chinese yellow cattle PrP^c.

关 键 词：朊粒 牦牛 双峰驼 原核细胞表达 

分 类 号：S852.659.7[农业科学—基础兽医学] Q786[农业科学—兽医学]