人前列腺干细胞抗原在大肠杆菌中的表达及抗血清的制备  

Expression of human prostate stem cell antigen in E.coli and preparation of its antiserum

作　　者：顾正勤[1] 许传亮[1] 孙颖浩[1] 高旭[1] 王林辉[1] 

机构地区：[1]第二军医大学长海医院泌尿外科

出　　处：《第二军医大学学报》2006年第3期344-346,共3页Academic Journal of Second Military Medical University

基　　金：国家自然科学基金(39900147);上海市科技启明星计划资助项目(02QB14001)~~

摘　　要：目的:克隆并在大肠杆菌中表达人前列腺干细胞抗原(PSCA)基因,制备其抗血清。方法:通过PCR方法扩增包含蛋白融合点的PSCA基因片段,经DNA测序证实后克隆至带有Trx.6H is标签的原核表达载体pET32 a,重组质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达结果,经N i-NTA树脂亲和纯化的蛋白皮下注射免疫小鼠,ELISA检测抗血清的滴度,免疫组化鉴定其特异性。结果:PCR扩增得到241 bp的目的片段,序列测定证实与GenBank上登录的序列一致;成功构建了PSCA基因片段的原核表达载体pET32 a-PSCA;在大肠杆菌中表达,于相对分子质量为20.4×103处有一蛋白新生带;PSCA融合蛋白免疫小鼠后,ELISA确认抗血清的滴度>1∶4 000。抗血清检测到前列腺癌组织中PSCA的表达。结论:成功克隆、表达了人PSCA融合基因片段,并制备了相应的抗血清。

关 键 词：前列腺 干细胞 抗原 基因表达 免疫血清 

分 类 号：R737.25[医药卫生—肿瘤]