利用流式细胞仪检测人外周血NK细胞毒性方法的建立  

MEASURING HUMAN PERIPHERAL NK CELL CYTOTOXICITY WITH FLOW CYTOMETRY

作　　者：张俊 钱亚云[2] 龚卫娟[2] 胡茂志 季明春[2] 

机构地区：[1]江苏省扬州市第四人民医院检验科,江苏扬州225003 [2]扬州大学医学院免疫学教研室,江苏扬州225001 [3]扬州大学测试中心,江苏扬州225009

出　　处：《实用临床医药杂志》2006年第4期28-31,35,共5页Journal of Clinical Medicine in Practice

基　　金：国家自然科学基金(30400399);江苏省自然科学基金(BK2004404);江苏省高校自然科学基金(04KJB320162)

摘　　要：目的利用流式细胞仪(FACS)技术检测人外周血NK细胞的毒性。方法首先将pEGFP-N1质粒转染人NK细胞的天然靶细胞K562,经过G418筛选后进一步单克隆化,得到稳定、均一表达绿色荧光蛋白的K562细胞。取对数期的K562-EGFP细胞与人外周血单个核细胞分别按5∶1、10∶1、20∶1、40∶1的比例混合,分别孵育0.5、1、2、4 h后用碘化丙啶(PI)标记,用流式细胞仪分析呈红、绿色荧光的细胞数,最后计算NK细胞的杀伤效率。结果0.5、1、2、4 h均能得到明显的杀伤效果,而且以2h的杀伤率最高。此时杀伤率与传统乳酸脱氢酶法(LDH)具有显著相关性(γ=0.997,P=0.003),而且显示出更强的敏感性。结论利用流式细胞仪检测NK细胞毒活性的方法可作为传统51Cr释放法、LDH法的一个补充,而且具有经济、快速和敏感的特点。Objective To establish a method of detecting human peripheral NK cell cytotoxicity with flow cytometry. Methods Enhanced green fluorescent protein （EGFP） was stably expressed in human erythroleukaemia K562 cells （EGFP-K562） and used as target cells. PBMCs were mixed with log-phase K562-EGFP cells in a series of effector and target ratio of 5 ： 1, 10 ： 1, 20 ： 1, 40： 1. After 0.5, 1, 2, 4 hour（s） of incubation, cells were labeled with propidium iodide （PI） and showed dual （green-red） fluorescent. Results Although the kinetic study demonstrated that all of the incubations got the cytolysis, the 2 hour incubation was the optional time. This technique strongly correlated with the traditional lactate dehydrogenase release assay at the correlation coefficients of 0. 997 and 0. 961 at p-value of 0. 003 and 0.04 for 2 and 4 h incubation times respectively. In addition, our method showed a higher sensitivity. Conclusions This is a simple, reliable, safe and high sensitive method to measure NK cytotoxicity with flow cytometry.

关 键 词：流式细胞仪 NK细胞 细胞毒性 K562-EGFP 

分 类 号：R730.5[医药卫生—肿瘤]