K562细胞定向表达cDNA文库的快速构建  

RAPID CONSTRUCTION OF THE cDNA LIBRARY OF K562 CELLS

作　　者：刘智[1] 唐迎胜[1] 周钢 曾海涛[1] 朱定尔[1] 

机构地区：[1]湖南医科大学分子生物学研究中心

出　　处：《中国现代医学杂志》1996年第4期12-14,共3页China Journal of Modern Medicine

基　　金：国家自然科学基金

摘　　要：采用一步法快速从培养的Ｋ５６２细胞中抽提、纯化ｍＲＮＡ，逆转录成ｃＤＮＡ分子后，通过在ｃＤＮＡ分子两端加ＥｃｏＲＩ适配子、Ｔ４多核苷酸激酶作用下磷酸化、ＮｏｔＩ内切酶消化、过ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ柱等步骤，与λＥｘＣｅｌｌ／ＮｏｔＩ／ＥｃｏＲＩ／ＣＩＰ载体连接，然后用包装蛋白在体外包装连接产物，感染Ｅ·ＣｏｌｉＮＭ５２２以构建ｃＤＮＡ文库。经检测：该文库含有１．０×１０６个重组子，ｃＤＮＡ分子长度在０．４～８．５ｋ６范围，扩增后的滴度达１．２×１０１０ｐｆｕ／ｍｌ，完全达到筛选低表达基因的要求，为从Ｋ５６２细胞中克隆新的锌指蛋白ｃＤＮＡ基因奠定了基础。

关 键 词：白血病 K562细胞 CDNA文库 锌指蛋白 

分 类 号：R733.72[医药卫生—肿瘤]