巴斯德梭菌甘油脱水酶基因的克隆表达、纯化及酶学性质的研究  

Expression,Purification and Characterization of Glycerol Dehydratase from Clostridium Pasteurianum

作　　者：唐悦[1] 孟晓蕾[1] 齐向辉[1] 韦宇拓[1] 黄日波[1] 

机构地区：[1]广西大学生命科学与技术学院,广西南宁530005

出　　处：《精细化工》2006年第11期1056-1059,共4页Fine Chemicals

基　　金：国家"863"高技术研究与发展计划项目资助项目(No.2003AA001039)~~

摘　　要：用聚合酶链反应（PCR）技术，从巴斯德梭菌（Clostridium pasteurianum）扩增出甘油脱水酶基因（dhaBCE），在大肠杆菌中高效表达，SDS—PAGE（聚丙烯酰胺凝胶）电泳结果显示，分别有相对分子质量为66、21、16kD三条特异性蛋白表达条带。用金属镍亲和层析及S-300H凝胶层析将重组蛋白进行分离纯化，所得纯酶的比活为4·26U／mg。重组酶的最适反应温度42～44℃，最适作用pH=9．10～9．50，它对三个底物结构类似物的米氏常数（Km）值分别是：1，2-丙二醇0．38mmol／L，甘油0．29mmol／L，1，2-乙二醇2．0mmol／L；对辅酶B12的Km值为0.22μmol／L。The gene encoding glycerol dehydratase from Clostridium pasteurianum was amplified by PCR and expressed in Rosetta （ DE3 ）. The recombinant protein was purified by immobilized metal affinity chromatography and gel filtration chromatography. The purified enzyme presented as three protein bands on SDS - PAGE with molecular weight of 66, 21 and 16 kD. The specific activity of glycerol dehydratase was 4.26 U/mg. The optimum activity of glycerol dehydratase was at pH 9. 10～9. 50 and 42～44℃. Km for the three main substrates were 0. 29 mmol/L for glycerol,0. 38 mmol/L for 1,2- propanediol and 2. 0 mmol/L for 1,2-ethanediol. Km for adenosylcobalamin coenzyme was 0. 22 μmol/L.

关 键 词：甘油脱水酶 基因表达 重组酶纯化 酶学性质 

分 类 号：Q786[生物学—分子生物学]