大鼠GLUT1基因的扩增及其重组腺病毒载体的构建  

作　　者：李方成[1] 李军亮[1] 梁伟强[2] 刘然义[3] 吴中华[1] 张培峰[1] 袁开长[1] 

机构地区：[1]中山大学附属第二医院神经外科,广东广州510120 [2]中山大学附属第二医院整形外科,广东广州510120 [3]中山大学肿瘤防治中心实验室,广东广州510060

出　　处：《中国病理生理杂志》2006年第11期2284-2286,共3页Chinese Journal of Pathophysiology

基　　金：国家自然科学基金资助(No.39900048);广东省自然科学基金资助(No.010721)

摘　　要：目的:构建携带大鼠葡萄糖转运体1基因(GLUT1)的复制缺陷型重组腺病毒载体,为进一步研究脑缺血缺氧引起的神经元死亡机制奠定基础。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法获取大鼠GLUT1基因全长cDNA,将其克隆至穿梭质粒pShuttle中构建穿梭质粒pShuttle-G lut1,经酶切后与线性化的腺病毒骨架质粒pAdeno-X体外连接并转化大肠杆菌DH5α,构建重组腺病毒质粒pAd-G lut1,酶切线性化重组腺病毒质粒后转染HEK293细胞包装成重组病毒颗粒,重组腺病毒在HEK293细胞中反复扩增数代后,分别用聚合酶链反应(PCR)及免疫印迹法(W estern b lotting)从基因和蛋白表达水平鉴定重组的腺病毒。结果:经PCR分析及DNA测序显示GLUT1 cDNA序列正确;筛选出重组腺病毒质粒pAd-G lut1后在HEK293细胞中成功包装出重组病毒,包装后冻融细胞行PCR及W estern b lotting检测表明重组腺病毒包装成功。结论:成功扩增了大鼠GLUT1基因并构建了携带大鼠GLUT1基因的复制缺陷型重组腺病毒载体,这有助于研究脑缺血缺氧引起的神经元死亡的机制。

关 键 词：葡萄糖转运体1 基因扩增 重组腺病毒载体 

分 类 号：R363[医药卫生—病理学]