环孢素A对乙型肝炎病毒作用的体外实验  

The effect of cyclosporine A on hepatitis B virus replication in vitro

作　　者：夏伟良[1] 沈岩[1] 谢海洋[1] 吴李鸣[1] 陈瑜[2] 郑树森[1] 

机构地区：[1]浙江大学医学院附属第一医院肝胆胰外科,卫生部多器官联合移植研究重点实验室,杭州310003 [2]浙江大学医学院附属第一医院检验科,杭州310003

出　　处：《中华传染病杂志》2006年第6期367-371,共5页Chinese Journal of Infectious Diseases

基　　金：国家重点基础研究发展计划资助项目(2003CB515501)

摘　　要：目的探讨环孢素A(CsA)在体外对乙型肝炎病毒(HBV)蛋白合成、DNA复制的影响。方法将不同浓度的CsA(0．6～20．0μg/ml)作用于HepG2．2．15细胞系,通过检测细胞培养上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)水平；以及细胞内乙型肝炎核心抗原(HBcAg)mRNA水平和HBV DNA水平来评价HBV复制情况；通过检测细胞内PyK2激酶402位点酪氨酸(PyK2 Y402)磷酸化水平来探讨CsA对HBV复制的作用机制。结果CsA对HBV复制具有抑制作用,随着CsA浓度的升高,对HBsAg和HBeAg的抑制率逐渐上升,细胞内HBV DNA复制水平下降。10．0μg/ml CsA作用4 d时,对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为49．7%和34．3%,HBV DNA的表达量仅为对照组的34．9%。在2．0μg/ml CsA作用下PyK2 Y402的磷酸化水平下降。结论CsA对HepG2．2．15细胞HBsAg和HBeAg表达、HBV DNA复制均有抑制作用,并呈剂量依赖性。CsA可能通过降低PyK2 Y402的磷酸化水平抑制HBV的复制。Objective To investigate the effect of cyclosporine A （CsA） on viral protein synthesis and hepatitis B virus （HBV） DNA replication in vitro. Methods The HBV DNA transfected cell line HepG2.2.15 was treated with different concentration of CsA （0.6-20.0 μg/ml） for 4 days. Hepatitis B surface antigen （HBsAg） and hepatitis B e antigen （HBeAg） in supernatant were detected by enzyme-linked immunosorbentassay （ELISA）; intracellular hepatitis B core antigen （HBcAg） mRNA and HBV DNA were analyzed by RT-PCR and slot blot hybridization, respectively; the phosphorylation at tyrosine acid position 402 of PyK2 kinase （PyK2 Y402） was detected by Western blot. Results CsA could suppress the expression of HBsAg and HBeAg, and inhibit the HBV DNA replication in a dose-dependent manner. The suppression rate of HBsAg and HBeAg under the action of CsA at the concentration of 10.0 μg/ml for 4 days was 49.7% and 34.3%, respective; similar effect was observed on HBV DNA replication, HBV DNA was only 34, 9% of the control at the concentration of 10.0 μg/ml of CsA, The phosphorylation level of PyK2 Y402 was declined under the action of CsA at the concentration of 2.0 μg/ml, Conclusions CsA can inhibit the expression of HBsAg, HBeAg and HBV DNA replication in the HepG2.2.15 cell line in a dose-dependent manner, Suppression of the phosphorylation level of PyK2 Y402 maybe involved in the mechanism of the inhibitory activity of CsA on HBV replication.

关 键 词：环孢菌素 肝炎病毒 乙型 抗原 DNA复制 

分 类 号：R512.62[医药卫生—内科学]