抗人CD3单链抗体与改形单域抗体的表达  

作　　者：刘喜富[1] 萧飒[1] 顾征[1] 王勇[1] 陈艾[1] 林晴[1] 张卫国[1] 黄华梁[1] 孙健[2] 陈润生[2] 沈倍奋[3] 陈兴[3] 

机构地区：[1]中国科学院遗传研究所,北京100101 [2]中国科学院生物物理研究所,北京100101 [3]军事医学科学院基础研究所,北京100850

出　　处：《中国科学（C辑）》1996年第5期428-435,共8页Science in China(Series C)

基　　金：国家"八六三"计划;国家自然科学基金资助项目

摘　　要：设计并化学合成含有适当酶切位点及连接肽的寡核苷酸序列,与一定的背景载体连接并改造成适用于单链抗体表达的载体:外分泌型pWAI80和融合蛋白型pROH80从分泌抗人CD3单克隆抗体的杂交瘤细胞UCHT1中,经PCR扩增出轻、重链可变区基因V_H和V_K,并插入上述表达载体中构建成单链抗体基因.通过对鼠OKT3结合位点的结构模拟,并比较人、鼠抗体家族性保守序列,设计出改形OKT3的基因序列.化学法部分合成8个寡核苷酸片段,应用重叠PCR技术扩增出完整改形重链基因V_H,并克隆、酶切和测序鉴定.将所克隆V_H基因插入表达载体pCOMB3和 pGEX-4T-1中进行表达.经 IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和 Western blot分析以及 ELISA检测,结果发现分泌型表达产物及 M13基因Ⅲ-V_H改形单域抗体融合蛋白具有与CD3单抗竞争抑制的活性;而融合型单链抗体及改形单域抗体表达产物主要以包涵体形式存在,占细菌总蛋白的 30％左右.

关 键 词：CD3 单链抗体 改形抗体 分子设计 基因表达 

分 类 号：R392-33[医药卫生—免疫学]