荚膜红细菌十聚异戊二烯焦磷酸合成酶异源表达及纯化的研究  

Heterologous Expression and Purification of Decaprenyl Diphosphate Synthase from Rhodobacter capsulatus B10

作　　者：刘欣毅[1] 张惠展[1] 袁勤生[2] 

机构地区：[1]华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室 [2]华东理工大学生物工程学院,上海200237

出　　处：《中国药学杂志》2007年第1期13-16,共4页Chinese Pharmaceutical Journal

摘　　要：目的构建生产辅酶Q10的大肠杆菌基因工程菌并研究相关酶的表达情况。方法将荚膜红细菌(Rhodobacter capsula-tusB10)中十聚异戊二烯焦磷酸合成酶编码基因ddsA分别克隆在Lac,T7和Trc启动子下游,使其在Escherichia coliJM83中表达。同时利用H is-tag的表达系统,对该酶的融合表达和镍柱纯化条件进行了研究。结果产物分析发现该基因在E.coli中表达出有活性的十聚异戊二烯焦磷酸合成酶,并使宿主产生辅酶Q10。同时,28℃培养过夜,该酶以可溶形式存在于上清液中。在150 mmol.L-1咪唑的洗涤条件下,从镍柱上解离,并可以达到电泳纯。结论大肠杆菌可以表达Rhodobacter capsula-tusB10的十聚异戊二烯焦磷酸合成酶,并合成辅酶Q10。OBJECTIVE To construct Escherichia coli producing coenzyme Q10 and investigate the decaprenyl diphosphate synthase expression. METHODS The ddsA gene encoding decaprenyl diphosphate synthase from Rhodobacter capsu/atus B10 was cloned downstream different promoters （ Lac, T7 and Trc） and heterologous expressed in E. coli JM83. The purification of ddsA fusion protein was investigated with His-tag system. RESULTS E. coli was observed to synthesize coenzyme Q10 in vivo. The fusion protein was expressed in supematant after being cultivating overnight at 28 ℃, and was separated by 150 mmol · L^-1 imidazole on Ni-sepharose column CONCLUSION E. coli can produce coenzyme Q10 by heterologous expressing the decaprenyl diphosphate synthase from Rhodobacter capsulatas B10.

关 键 词：辅酶Q10 十聚异戊二烯焦磷酸合成酶 融合表达 镍柱纯化 

分 类 号：Q7[生物学—分子生物学]