重组人黑色素瘤抗原MAGE3/HSP70融合蛋白工程菌的高密度发酵及其免疫学活性  

High cell-density fermentation of engineered E.coli and antitumor immunity of recombinant human MAGE3/HSP70 in vivo

作　　者：胡沛臻[1] 路凡[2] 王孝功[2] 李侠[1] 司少艳[1] 黄杨[1] 马斌[1] 张秀敏[1] 隋延仿[1] 

机构地区：[1]第四军医大学西京医院病理科 [2]第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西西安710033

出　　处：《第四军医大学学报》2007年第3期201-205,共5页Journal of the Fourth Military Medical University

基　　金：国家自然科学基金(30271464);全军医药卫生科研基金重点资助项目(012084)

摘　　要：目的:实现重组人黑色素瘤抗原MAGE3/HSP70融合蛋白工程菌的高密度发酵,并测定MAGE3/HSP70融合蛋白在体内的抗肿瘤免疫效应.方法:利用自控发酵罐发酵,采用溶氧反馈,分批补料的方法对MAGE3/HSP70融合蛋白工程菌进行了高密度发酵,从菌体中纯化MAGE3/HSP70融合蛋白,并用所纯化的MAGE3/HSP70融合蛋白免疫小鼠,运用酶联免疫斑点法(ELISPOT)和细胞毒性杀伤实验(LDH)检测了融合蛋白激活机体细胞免疫反应的状况.结果:高密度发酵取得成功,发酵菌中MAGE3/HSP70融合蛋白的表达量与摇瓶中的相当,摸索出发酵水平纯化MAGE3/HSP70融合蛋白工艺,ELISPOT和LDH显示MAGE3/HSP70可以激活机体免疫反应,并产生针对MAGE3的CTL,特异性杀伤表达MAGE3的肿瘤细胞.结论:MAGE3/HSP70融合蛋白工程菌成功实现高密度发酵,MAGE3/HSP70融合蛋白可以有效激活机体免疫反应,产生针对特异性抗原MAGE3的CTL,免疫学活性良好,为新型抗肿瘤疫苗临床前研究奠定了良好基础.AIM： To realize high cell-density fermentation of MAGE3/HSP70 engineered E. coli, and to evaluate the antitumor immunity of MAGE3/HSP70 fusion protein in vivo. METHODS ： High cell-density fermentation of MAGE3/HSP70 enginered E. coli was carried out with constant soluble oxygen and continuous cultivation in self-control fermentor. The mouse was immunized by purified MAGE3/HSP70 fusion protein in E. coli, and the antitumot immunity was detected by ELISPOT and LDH release assay. RESULTS： High cell-density fermentation of MAGE3/HSP70 engineered E. coli was successful, and the expression of MAGE3/ HSP70 in fermented bacterial was the same as the flask culture. The results of ELISPOT and LDH release assay showed that MAGE3/HSP70 generated tumor specific cytotoxic T lymphocyte （CTL） to damage tumor cell. CONCLUSION： High celldensity fermentation of MAGE3/HSP70 engineered E. coli was realized and MAGE3/HSP70 fusion protein can generate specific CTL to kill tumor cell.

关 键 词：黑色素瘤抗原 发酵 大肠杆菌 

分 类 号：Q93-335[生物学—微生物学] R322[医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]