人抑瘤素M基因重组逆转录病毒载体的构建及鉴定  

作　　者：苗莉[1] 赵耀东[1] 杨伟明[1] 叶建新[1] 谢宇锋[1] 盛伟华[1] 杨吉成[1] 缪竞诚[1] 张日[2] 朱南康[3] 

机构地区：[1]苏州大学医学院细胞与分子生物学教研室,215007 [2]苏州大学附属第一医院血液科 [3]苏州大学放射医学院辐照技术研究所

出　　处：《中华临床医学杂志》2007年第1期3-5,共3页Chinese Journal of Clinical Practical Medicine

基　　金：国防科工委基础科研计划（K0102061501）

摘　　要：目的构建携带人Oncostatin M（OSM，抑瘤素M）基因的逆转录病毒载体。方法用DNA重组技术，以pcDNA3．1finyc-his（-）A-hOSM重组质粒为模板PCR扩增人OSM基因，酶切连接到带有GFP标记的逆转录病毒载体pEGZ／MCS．HA上，连接产物转化大肠杆菌DH5a，筛选阳性克隆，抽提质粒，用PCR法、限制性内切酶EeoRI和BamHI双酶切法及测序鉴定。然后以脂质体转染法，将重组的逆转录病毒载体与辅助质粒HIT456、HIT60共同转染入包装细胞系293T以包装病毒。结果构建了重纽人抑瘤素M基因逆转录病毒载体，PCR产物电泳可见约750bp处有特异性条带，EcoRI和BamH，双酶切，电泳出现两个条带，约750bp处亦有相应条带。核酸测序结果与GenBank中所报道的人抑瘤素M基因的CDS序列完全一致。转染293T细胞在倒置荧光显微镜下可见绿色荧光，且细胞有病变。提示构建携带人OSM基因的逆转录载体成功。结论携带人抑瘤素M基因的重组逆转录病毒载体pEGZ／MCS-HA-hOSM成功构建为此基因的临床应用和实验研究奠定了基础。

关 键 词：抑瘤素M 逆转录病毒载体 基因重组 

分 类 号：R-332[医药卫生]